(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202211285127.3 (22)申请日 2022.10.20 (71)申请人 迈基诺 （重庆） 基因科技有限责任公 司 地址 400026 重庆市江北区港城东环路6号 1幢1-2、 2-2、 3 -2、 4-2、 5 -2、 6-2 (72)发明人 伍建　王芃芃　姬晓雯　 (74)专利代理 机构 北京星通盈泰知识产权代理 有限公司 1 1952 专利代理师 黄正奇 (51)Int.Cl. C12Q 1/6883(2018.01) C12Q 1/6858(2018.01) C12Q 1/6869(2018.01) C12N 15/11(2006.01) (54)发明名称 一种TSEN2基因突变检测试剂盒、 方法及系 统 (57)摘要 本发明涉及基因检测技术领域， 具体涉及一 种TSEN2基因突变检测试剂盒、 方法及系统； 本方 法包括提取怀孕母亲羊水样本， 进行DNA提取； 设 计TSEN2:c.926A>G和TSEN2:c.882_883insT位点 的引物； 进行PCR扩增； 将PCR扩增后的产物进行 纯化， 再进行Sanger测序， 经Blast比对， 若发现 碱基变异， 则重复三次双向测序， 判断TSEN2: c.926A>G和TSEN2:c.882_883insT位点碱基是否 变异； 本发明通过设计引物， 对TSEN2基因TSEN2: c.926A>G和TSEN2:c.882_883insT位点进行突变 检测， 通过怀孕母亲羊水的检测， 判断胎儿患脑 桥小脑发育不良的几率， 实现对胎儿患脑桥小脑 发育不良的产前 预测。 权利要求书1页 说明书6页 CN 115521980 A 2022.12.27 CN 115521980 A 1.一种TSEN2基因突变 检测方法， 其特 征在于， 包括： 提取怀孕母亲羊水样本， 进行DNA提取； 设计TSEN2:c.9 26A>G和TSEN2:c.8 82_883insT位点的引物； 进行PCR扩增； 将PCR扩增后的产物进行纯化， 再进行Sanger测序， 经Blast比对， 若发现碱基变异， 则 重复三次双向测序， 判断TSEN2:c.9 26A>G和TSEN2:c.8 82_883insT位点碱基是否变异。 2.根据权利要求1所述TSEN2基因突变 检测方法， 其特 征在于， 所述引物包括： TSEN2:c .926A>G： 正向引物TTAAGAGCATTTGTATTTGAGGTGA， 反向引物 CTTTTGCTCGAACAGTCCCAC； TSEN2:c.882_883insT： 正向引物GACATGTAGTGCTTCCATTTGTTC， 反向引物 GCAGGCCTACTTGGGAGCTA。 3.根据权利 要求1所述TSEN2基因突变检测方法， 其特征在于， 所述PCR扩增的反应体系 包括： 2重量份DNA、 0.5重量份正向引物、 0.5重量份反向引物、 12.5重量份Fast  PCR Master  Mix、 9.5重量份ddH2O。 4.根据权利 要求1所述TSEN2基因突变检测方法， 其特征在于， 所述PCR扩增的反应条件 为： 94℃变性1分钟， 以98℃5秒、 5 5℃‑65℃5秒循环3 0次， 72℃延伸1mi n。 5.根据权利要求1所述TSEN2基因突变检测方法， 其特征在于， 通过全外显子测序验证 所述TSEN2:c.9 26A>G和TSEN2:c.8 82_883insT位点碱基是否变异。 6.一种用于检测TSEN2基因突变的试剂盒， 其特 征在于， 包括权利要求2中所述引物。 7.根据权利 要求6所述用于检测TSEN2基因突变的试剂盒， 其特征在于， 包括0.5重量份 正向引物、 0.5 重量份反向引物、 12.5 重量份Fast  PCR Master Mix、 9.5重量份ddH2O。 8.一种TSEN2基因突变检测系 统， 其特征在于， 包括提取模块、 引物设计模块、 PCR扩增 模块和检测模块； 所述提取模块， 用于提取怀孕母亲羊水样本， 进行DNA提取； 所述引物设计模块， 用于设计TSEN2:c.9 26A>G和TSEN2:c.8 82_883insT位点的引物； 所述PCR扩增模块， 用于进行PCR扩增； 所述检测模块， 用于将PCR扩增后的产物进行纯化， 再进行Sanger测序， 经Blast比对， 若发现碱基变异， 则重复三次双向测序， 判断TSEN2:c.926A>G和TSEN2:c.882 _883insT 位点 碱基是否变异。 9.根据权利 要求8所述TSEN2基因突变检测系统， 其特征在于， 还包括验证模块； 所述验 证模块用于通过全外显子测序验证所述TSEN2:c.926A>G和TSEN2:c.882_883insT 位点碱基 是否变异。 10.权利要求6或7所述用于检测TSEN2基因突变的试剂盒在制备检测脑桥小脑发育不 良试剂中的应用。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 115521980 A 2一种TSEN2基因 突变检测试剂盒、 方 法及系统 技术领域 [0001]本发明涉及 基因检测技术领域， 具体涉及一种TSEN2基因突变检测试剂盒、 方法及 系统。 背景技术 [0002]脑桥小脑发育不良(Pont ocerebellar  hypoplasia， P CH)呈常染色体隐性遗传， 是 一组具有临床表型异质性和遗传异质性的神经发育障碍疾病， 临床表型可表现为严重的运 动障碍及认知障碍， 常伴有癫痫发作。 脑桥小脑发育不良的脑部症状通常包括脑桥及小脑 发育不良、 萎缩， 进行性加重的小头畸形和不同程度的脑室扩大， 并且大脑也受累， 预后较 差， 甚至很多患者在婴幼儿、 儿童时期死亡。 PCH患者脑部的病理方面改变可显示出神经元 脱失、 浦肯野细胞脱失、 齿状核碎裂、 变性， 下橄榄核减少， 通常小脑半球的受累往往比小脑 蚓体更加严重， 出现小脑皮质变性、 脑桥腹侧核与横行纤维脱失的情况等。 [0003]PCH2被分为4种亚型， P CH2A、 PCH2B、 PCH2C、 PCH2D， 而P CH2B是一种非常罕见的脑部 疾病， 国内目前尚未见报道， 更没有相应的检测 手段。 PCH2B的特点是出生时呼吸和喂养困 难、 锥体外系运动障碍、 严重的发育障碍、 进行性小头畸形。 病理表现通常是是小脑半球萎 缩， 相对保留蚓部 。 发明内容 [0004]针对上述问题， 本发明旨在提供一种TSEN2基因突变检测 试剂盒、 方法及系统， 以 解决目前对TSEN2基因突变检测不完善的问题， 进一步实现对脑桥小脑发育不良的早期筛 查。 [0005]为了解决上述问题， 本发明采用了如下的技 术方案： [0006]一种TSEN2基因突变 检测方法， 包括： [0007]提取怀孕母亲羊水样本， 进行DNA提取； [0008]设计TSEN2:c.9 26A>G和TSEN2:c.8 82_883insT位点的引物； [0009]进行PCR扩增； [0010]将PCR扩增后的产物进行纯化， 再进行Sanger测序， 经Blast比对， 若发现碱基变 异， 则重复三次双向测序， 判断TSEN2:c.926A>G和TSEN2:c.882_883insT位点碱基是否变 异。 [0011]进一步， 所述引物包括： [0012]TSEN2:c .926A>G： 正向引物TTAAGAGCATTTGTATTTGAGGTGA， 反向引物 CTTTTGCTCGAACAGTCCCAC； [0013]TSEN2:c.882_883insT： 正向引物GACATGTAGTGCTTCCATTTGTTC， 反向引物 GCAGGCCTACTTGGGAGCTA。 [0014]进一步， 所述PCR扩增的反应 体系包括： [0015]2重量份DNA、 0.5重量份正向引物、 0.5重量份反向引物、 12.5重量份Fast  PCR 说　明　书 1/6 页 3 CN 115521980 A 3