(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210766311.3 (22)申请日 2022.06.30 (71)申请人 华南农业大 学 地址 510642 广东省广州市五山路483 (72)发明人 张新珩　谢青梅　巫秀红　刘远佳　 陈峰　吴志强　严专强　刘佳佳　 (74)专利代理 机构 北京高沃 律师事务所 1 1569 专利代理师 吴波 (51)Int.Cl. C12Q 1/70(2006.01) C12Q 1/6844(2018.01) C12N 15/11(2006.01) C12R 1/93(2006.01) (54)发明名称 一种RAA荧光法检测鸡传染性贫血病毒的引 物探针组、 试剂盒及其应用 (57)摘要 本发明提供了一种RAA荧光法检测鸡传染性 贫血病毒的引物探针组、 试剂盒及其应用， 属于 生物检测技术领域。 本发明提供的RAA荧光法检 测鸡传染性贫血病毒的引物探针组中， 正向引物 的核苷酸序列如SEQ  ID NO.1所示， 反向引 物的 核苷酸序列如SEQ  ID NO.2所示， 探针的核苷酸 序列如SEQ  ID NO.3所示。 利用本发明引物探针 组可以检测低拷贝的鸡传染性贫血病毒核酸， 能 够在30min内完成检测、 具有操作简便、 成本低、 灵敏度高、 特异性强、 假阳性 率低等优势。 权利要求书1页 说明书6页 序列表2页 附图3页 CN 114959120 A 2022.08.30 CN 114959120 A 1.一种RAA荧光法检测鸡传染性贫血病毒的引物探针组， 其特征在于， 所述引物包括正 向引物和反向引物， 所述正向引物的核苷 酸序列如SEQ  ID NO.1所示， 所述反向引物的核苷 酸序列如SEQ  ID NO.2所示， 所述探针的核苷酸序列如SEQ  ID NO.3所示。 2.权利要求1所述引物探针组在制备检测鸡传染性贫血病毒产品中的应用。 3.一种非诊断目的的检测鸡传染性贫血病 毒的方法， 其特征在于， 包括以下步骤： 提取 待测样本的DNA， 以待测样 本的DNA为模板， 利用权利要求1所述引物探针组进行RAA反应； 若 出峰时间≤20min或Ct值≤39， 则待测样本为鸡传染性贫血病毒阳性； 若出峰时间＞20min 或Ct值＞39， 则待测样本为鸡传染性贫血病毒阴性。 4.根据权利要求3所述的方法， 其特征在于， 所述RAA反应的程序 为： 41℃60s； 41℃30s， 40个循环。 5.根据权利要求3所述的方法， 其特征在于， 所述RAA反应的体系为： RAA反应干粉1管， A 液25 μL， B液2.5 μL， 正向、 反向引物各2 μL， 探针0.6 μL， ddH2O 12.9‑15.9 μL， DNA模板2 ‑5 μL， 总体积50 μL。 6.根据权利要求5所述的方法， 其特 征在于， 所述A液为聚乙二醇， B液为醋酸镁。 7.一种检测鸡传染性贫血病 毒的试剂 盒， 其特征在于， 所述试剂 盒包括权利要求1所述 引物探针组。 8.根据权利要求6所述的试剂 盒， 其特征在于， 所述试剂 盒还包括阳性对照品和阴性对 照品。 9.根据权利要求7所述的试剂 盒， 其特征在于， 所述阳性对照品包括含有核苷酸序列如 SEQ ID NO.4所示的核酸， 所述阴性对照品包括d dH2O。 10.根据权利要求6所述的试剂 盒， 其特征在于， 所述试剂 盒中正向引物、 反 向引物和探 针的浓度比例关系为1:1:1。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 114959120 A 2一种RAA荧光法检测鸡传染性贫 血病毒的引物探针组、 试剂盒 及其应用 技术领域 [0001]本发明属于生物检测技术领域， 尤其涉及一种RAA荧光法检测鸡传染性贫血病毒 的引物探针组、 试剂盒及其应用。 背景技术 [0002]鸡传染性贫血病(Chicken  infectious  anemia,CIA )是由鸡传染性贫血病毒 (Chicken  infectious  anemia virus,CIAV)引起的免疫抑制病。 CIAV属于环形病毒属 (gyrovirus)， 无囊膜， 呈20面体对称， 几乎 所有的CIA V基因组大小都为2 298核苷酸(nt)。 [0003]鸡是CIAV的唯一宿主， 各年龄鸡均易感， 主要危害2 ‑3周龄雏鸡。 CIAV主要侵害骨 髓造血组织和中枢免疫器官胸腺， 导致骨髓黄化和胸腺萎缩， 临床症状表现为再生障碍性 贫血及全身性淋巴组织萎缩。 CIAV流行范围广泛， 分布在全球各地， 可通过垂直传播， 也可 通过水平传播， 此外， CIAV已在多种 禽弱毒疫苗被检测到， 给CIAV的防治带来极大的难度。 因此， 在防控上， 特异性检测CIA V的方法尤为重要。 [0004]CIAVVP2蛋白是最保守的蛋白， 对病毒的复制存在 影响， 在早期的抗体检测方面发 挥重要作用 。 因此， CIAV  VP2常作为检测靶点。 CIAV的实验室检测包含常规PCR、 nested ‑ PCR、 实时荧光定量P CR、 核酸斑点杂交等， 但是研究表明， 使用常规PCR检测CIAV混合污染的 疫苗存在漏检的风险并且灵敏度低于nested ‑PCR和实时荧光定量PCR。 而且以上4种检测方 法均需要笨重或昂贵的仪器设备， 检测时间长， 对于检测人员的要求高， 需进行专业培训， 实际上仅能适于实验室的辅助诊断， 无法推广应用。 发明内容 [0005]有鉴于此， 本发明的目的在于提供一种RAA荧光法检测鸡传染性贫血病毒的引物 探针组， 采用本发明引物探针组进行鸡传染性贫血病毒的检测， 具有检测方法简单、 灵敏度 高、 不需要昂贵仪器设备、 检测时间短、 适于大规模推广应用的优势。 [0006]为了实现上述发明目的， 本发明提供了以下技 术方案： [0007]本发明提供了一种RAA荧光法检测鸡传染性贫血病毒的引物探针组， 所述引物包 括正向引物和反向引物， 所述正向引物的核苷 酸序列如SEQ  ID NO.1所示， 所述反向引物的 核苷酸序列如SEQ  ID NO.2所示， 所述探针的核苷酸序列如SEQ  ID NO.3所示。 [0008]本发明还提供了一种上述引物探针组在制备检测鸡传染性贫血病毒产品中的应 用。 [0009]本发明还提供了一种非诊断目的的检测鸡传染性贫血病毒的方法， 包括以下步 骤： 提取待测样 本的DNA， 以待测样 本的DNA为模板， 利用上述引物探针组进 行RAA反应； 若出 峰时间≤20min或Ct值≤39， 则待测样本为鸡传染性贫血病毒阳性； 若出峰时间＞20min或 Ct值＞39， 则待测样本为鸡传染性贫血病毒阴性。 [0010]优选的， 所述RA A反应的程序为： 41℃6 0s； 41℃3 0s， 40个循环。说　明　书 1/6 页 3 CN 114959120 A 3