(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210923955.9 (22)申请日 2022.08.02 (71)申请人 台州和和生物科技有限公司 地址 318000 浙江省台州市集聚 区东环大 道638号7幢108室 (72)发明人 万娜赛拉　张玉丽　裘霖　张云福　 裘建英　戎吉波　 (74)专利代理 机构 北京久维律师事务所 1 1582 专利代理师 邢江峰 (51)Int.Cl. C12Q 1/6886(2018.01) C12N 15/11(2006.01) (54)发明名称 一种HE4基因的原位杂交早期筛查试剂盒 (57)摘要 本发明公开了一种HE4基因的原位杂交早期 筛查试剂盒， 所述的试剂盒包括杂交探针、 标记 物， 所述的杂交探针序列如SEQ  ID NO.1所示 (AF330262： map＝"20q12 ‑q13 .2"， CDS： 18.....326)。 本发明的诊断试剂盒的组份是由 杂交探针， 杂交液， 显色剂， 增效剂等组成。 本试 剂盒的核酸杂交原理是分子生物学业内人士均 熟知， 具体操作步骤是标本处理、 预杂交、 杂交、 免疫组化染色、 镜下进行定量分析、 结果报告。 权利要求书1页 说明书9页 附图1页 CN 115232876 A 2022.10.25 CN 115232876 A 1.一种HE4基因的原位杂交早期筛查试剂盒， 试剂盒包括杂交探针、 标记物， 其特征在 于， 所述的杂交探针序列如SEQ  ID NO.1所示， 其特征在于： 所述的杂交探针序列如SEQ  ID  NO.1所示的RNA序列。 2.根据权利要求1所述的一种HE4基因的原位杂交早期筛查试剂盒， 其特征在于， 所述 的标记物选自放 射性核素或非放 射性标记物。 3.根据权利要求2所述的一种HE4基因的原位杂交早期筛查试剂盒， 其特征在于， 所述 的放射性核素选自3H、35S、125I或32P中的一种。 4.根据权利要求2所述的一种HE4基因的原位杂交早期筛查试剂盒， 其特征在于， 所述 的非放射性标记物选自生物素、 地高辛、 碱性磷酸酶、 辣 根过氧化酶或荧光素中的一种。 5.根据权利要求2所述的一种HE4基因的原位杂交早期筛查试剂盒， 其特征在于， 所述 的非放射性标记物优选自地高辛。 6.根据权利要求1所述的一种HE4基因的原位杂交早期筛查试剂盒， 其特征在于， 所述 的试剂盒还 包括杂交液、 显色剂、 增效剂； 所述的增效剂是碱性磷酸酶抗体。 7.如权利要求1 ‑6任一所述的一种HE4基因的原位杂交早期筛查试剂盒的应用， 其特征 在于， 包括以下步骤： 一、 在权利要求1所述的杂交探针与靶序列可形成稳定杂交复合体的条件下， 将底物中 待测RNA与杂交探针接触， 形成杂交复合体； 二、 检测所述杂交复合体。 8.根据权利要求7所述的一种HE4基因的原位杂交早期筛查试剂盒的应用， 其特征在 于， 可形成稳定杂交复合体的条件为： 核酸杂交的温度为42℃； 核酸杂交的时间为 16－24小 时。 9.根据权利要求7所述的一种HE4基因的原位杂交早期筛查试剂盒的应用， 其特征在 于， 所述的底 物选用人的血 液白细胞 标本。 10.根据权利要求9所述的一种HE4基因的原位杂交早期筛查试剂盒的应用， 其特征在 于， 所述的血液白细胞标本为早期卵巢癌或者、 卵巢癌转移患者、 经治疗后病人及正常人的 标本。 11.根据权利要求10所述的一种HE4基因 的原位杂交早期筛查试剂 盒的应用， 其特征在 于， 所述包括观察临床上 的卵巢癌前病理演变过程， 及卵巢癌经治疗后的复发和转移病理 演变过程。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 115232876 A 2一种HE4基因的原位杂交 早期筛查试剂盒 技术领域 [0001]本发明涉及试剂盒领域， 具体是一种H E4基因的原位杂交早期筛查试剂盒。 背景技术 [0002]近年来， 可怕的癌症步步逼近我们， 对于女性来说， 除了乳腺癌之外， 妇科肿瘤也 日渐高发， 其中卵巢癌就是个典型代表。 据调查， 在所有妇科肿瘤中， 卵巢癌占到了23％， 死 亡率却占到了47％。 卵巢体积虽小， 却是肿瘤最多发的器官。 卵巢癌早期无症状， 加上卵巢 深居盆腔内， 发生肿瘤不易被早期发现， 目前 临床确诊的患者有 70％已是晚期， 且死亡率高 达70％以上。 因此， 妇科临床更应该对其进行深入了解和 研究， 建立更早期、 更准确的临床 早期筛查手段， 以便捕捉到任何卵巢癌病变前期的蛛丝马迹， 进 而能够及早发现及早治疗。 [0003]目前卵巢癌诊断的常用生物标记物是癌抗原125(cancer  antigen 125， CA125)， 但是这一肿瘤标记物在卵巢癌早期诊断中检出率不高， 敏感度与特异度不够。 科学家急需 找到更合适的肿瘤标记物， 而 人附睾蛋白4(HE4)被发现后应运而生， HE4编码 基因最早是由 Kichhoff等人于1991年从附睾上皮远端分离出来， 位于染色体20q上， 全长为12kb左右， 1999年Schummer等人通过cDNA微阵列分析， 发现HE4(又名WFDC2)mRNA在卵巢癌组织中高表 达， 而在癌旁组织中不表达。 之后越来越多的实验证明HE4具有卵巢癌诊断的价值， 而且在 早期诊断中优于CA125。 北京大学人民医院妇科肿瘤中心的研究人员以491例中 国妇女血清 为样品， 分析了HE4作为卵巢癌肿瘤标记物的效果， 这些血清包括罹患卵巢癌， 良性肿瘤的 病患， 以及健康样品对照。 研究人员采用预设Cuto ffs值(HE4>150pmol/L， CA125>35U/mL)， 和受试者工作特征曲线(基于95％， 98％敏感度定义Cut offs值)， 评估了这两种肿瘤标记物 单用， 以及联用的检测灵敏度， 特异 性。 结果他们发现在基线 水平， 卵巢癌 样品中血清HE4和 CA125水平比5个对照组要 高得多， 而在预设Cutoffs值评估方面， HE4检测卵巢癌的特异性 为90％‑100％， CA125特异性为36％(良性肿瘤) ‑99％， 并且这两个肿瘤标记物联用可以将 诊断特异性 提高到10 0％！ [0004]同时通过受试者工作特征曲线， 研究人员也发现HE4两个值的特异性分别为 102.6pmol/L， 150.2pmol/L， CA12 5分别为127.2U/mL和32 5.5U/mL。 如果添加HE4， 那么CA12 5 诊断卵巢癌， 并将其与良性肿瘤区分开来的特异性可以提高到78％(95％特异性 )， 68％ (98％特异性)。 从这些实验数据中， 研 究人员认为比较于单独使用CA125， 在中国人群中联 合使用HE4与CA125将提高诊断卵巢癌的特异 性， 这与之前欧美等国家进 行的研究实验 结果 相一致。 [0005]目前， 检测卵巢癌主要有两种方法： 一种是经阴道超声检查(TUV)， 这种成像方法 可用于检查女性的生殖器官， 包括子 宫、 卵巢、 宫颈及阴道。 尽管其应用非常普遍， 但是这种 方法并不能准确检测出该肿块是良性还是恶性， 该方法还需要经验丰富的临床技师对检测 结果进行解读； 另一种常规检测方法是检测生物标志物CA125(癌抗原125)， 这种方法被视 为卵巢癌诊断的 “金标准”， 但也有其局限性， CA125的特异性及敏感度较低， 容易出现假阴 性或假阳性。 大约有50％的卵巢癌I期患者并没有出现CA125升高的现象， 也就是说有一半说　明　书 1/9 页 3 CN 115232876 A 3