(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210574422.4 (22)申请日 2022.05.24 (71)申请人 安徽环球 基因科技有限公司 地址 239000 安徽省滁州市经济技 术开发 区祈福寺西路69号 (72)发明人 缪连军　刘宗文　潘红　张磊　 张志鹏　刘倩　朱桃花　 (74)专利代理 机构 合肥正则元起专利代理事务 所(普通合伙) 3416 0 专利代理师 胡玉 (51)Int.Cl. C12N 15/11(2006.01) C07K 16/06(2006.01) (54)发明名称 一种CpGODN佐剂及其在抗体生产中的应用 (57)摘要 本发明涉及一种CpG  ODN佐剂及其在抗体生 产中的应用， 属于多克隆抗体生产技术领域。 所 述CpG ODN佐剂在抗体生产中的应用为按照 CpGODN‑1、 CpG ODN‑2、 CpG ODN‑3、 CpG ODN‑4、 CpG ODN‑5、 CpG ODN‑6、 CpGODN ‑7、 CpG ODN‑8、 CpG ODN‑9和CpG ODN‑10序列中的一种或几种进 行合成后， 然后混合， 再与阳离子脂质体试剂等 体积混合， 作为CpG  ODN混合佐剂用于抗体生产。 使用本发明提供的为CpG  ODN混合佐剂， 可将常 规的动物免疫周期由10周缩短至4周。 生产的多 克隆抗体产品效价明显高于对照组， 抗体产量也 比对照组高。 权利要求书1页 说明书7页 CN 114836416 A 2022.08.02 CN 114836416 A 1.一 种 C p G  O D N 佐 剂 ， 其 特 征 在 于 ： 由 以 下 序 列 组 成 ： C p G  O D N‑1 为 TGACTGTGAACGTTCGAGAAGA； CpG  ODN‑2为ATTCCTGCACGTTCGAGTCCATT； CpG  ODN‑3为 CCTTCATTCCGTTCGGGTACATT； CpG  ODN‑4为TTTCACCTCGTTCGTTACCTGAC； CpG  ODN‑5为 AACTGTAACCGTTCGTCCACTAC； CpG  ODN‑6为TTACAATCACGAACGTTCATCG； CpG  ODN‑7为 AACTTCACGTTCGACTTTCTAGA； CpG  ODN‑8为ATCCATTCGTTCGAATCATACCTA； CpG  ODN‑9为 AATTCTTCGTTCGATCGT TCGTAA； CpG ODN‑10为TACTC CCTCGTTCGATCGC CTCAGT。 2.一种CpG  ODN佐剂在抗体生产中的应用， 其特征在于： 合成权利要求1所述的CpG  ODN 佐剂中CpG  ODN‑1、 CpG ODN‑2、 CpG ODN‑3、 CpG ODN‑4、 CpG ODN‑5、 CpG ODN‑6、 CpG ODN‑7、 CpG ODN‑8、 CpG ODN‑9和CpG ODN‑10序列中的一种或几种， 然后混合， 再与阳离子脂质体试 剂等体积混合， 作为CpG  ODN混合佐剂用于抗体生产。 3.根据权利要求2所述的一种CpG  ODN佐剂在抗体生产中的应用， 其特征在于： 包括以 下步骤： 步骤一、 抗原准备； 步骤二、 CpG  ODN混合佐剂准备： 合成序列CpG  ODN‑1、 CpG ODN‑2、 CpG ODN‑3、 CpG ODN‑ 4、 CpG ODN‑5、 CpG ODN‑6、 CpG ODN‑7、 CpG ODN‑8、 CpG ODN‑9和CpG ODN‑10中的一种或几 种， 然后进行混合， 并与阳离 子脂质体试剂等体积混合， 静置 30min后， 待用； 步骤三、 免疫试验以及抗体提取。 4.根据权利要求3所述的一种CpG  ODN佐剂在抗体生产中的应用， 其特征在于： 步骤三 的具体操作如下： i.使用弗氏完全佐剂进行基础免疫， 3天后对动物 注射CpG ODN混合佐剂； ii.7天后使用弗氏不完全佐剂进行第一次加强免疫， 同时给动物注射CpG  ODN混合佐 剂； iii.14天后使用步骤i i中的操作进行第二次加强免疫； iv.21天后使用步骤i i中的操作进行第三次加强免疫； v.28天后进行 血清终放采集， 并检测效价， 抗体纯化。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 114836416 A 2一种CpG ODN佐剂及其在抗体生产中的应用 技术领域 [0001]本发明属于多克隆抗体生产技术领域， 具体地， 涉及一种CpG  ODN佐剂及其在抗体 生产中的应用。 背景技术 [0002]多克隆抗体指用包含多种抗原决定簇 的抗原免疫动物， 可刺激机体多个B细胞克 隆产生针对多种抗原表位的不同抗体， 所获得的免疫血清实际上是含有多种抗体的混合 物。 在体外诊断试剂中， 免疫比浊法试剂可以使用单克隆抗体或多 克隆抗体， 使用单克隆抗 体成本较高， 因为只能识别有限表位， 不能保证对样本中靶蛋白的完全识别。 因此， 目前市 场上免疫比浊试剂大都采用多 克隆抗体。 多 克隆抗体成本较低， 可以批量生产， 但对生产周 期、 抗体效价、 批间差异等都有着很高的要求。 多克隆抗体一般制备流程为抗原制备、 动物 免疫、 效价检测、 血清采集与处理， 抗体纯化。 其中动物免疫主要是使用合适的佐剂配合抗 原接种动物， 按照一定的免疫方案进行多次接种， 使其尽可能快速、 高效、 大量的产生特异 性抗体。 [0003]CpG ODN佐剂是一种含有非甲基化胞嘧啶鸟嘌呤的脱氧核苷酸序列， 可以增强抗 原的加工递呈， 诱导体液免疫。 CpG  ODN通过激活TLR9信号， 可以与B细胞抗原受体信号协同 促进初始B细胞、 已诱 发B细胞和记忆性B细胞的激活， 并进一步分化为分泌抗体分子的浆细 胞。 TLR9主要由浆细胞和B细胞表达， 暴露于TLR9激动剂中的B淋巴细胞更容易被抗原激活 以反映它们作为免疫增强剂的效用。 一般来说， 由于初始B细胞不具备表达TLR9的能力， 所 以其对于CpG  ODN的激活作用并无响应， 因此必须事先用抗原刺激初始B细胞 以确保其被 CpG ODN激活后可分化成浆细胞。 CpG  ODN能够人工合成， 可应用于多种抗原， 以冻干粉保 存， 状态稳定， 便 于运输， 为 其作为免疫佐剂产业 化提供了有力的基础支持。 [0004]现有技术公开了CpG  ODN佐剂在多种人类疫苗、 动 物疫苗中的具体序列、 制备和应 用方法， 可以明显增强疫苗的效果。 而在多克隆抗体的生产过程中， 选择合适的CpG  ODN佐 剂， 设计合理的方案， 配合传统的免疫技术， 发挥其免疫增强剂的作用， 使得多克隆抗体的 生产的周期更短， 抗体效价更高。 发明内容 [0005]本发明的目的在于提供一种CpG  ODN佐剂及其在抗体生产中的应用， 以解决背景 技术中的问题。 [0006]本发明的目的可以通过以下技 术方案实现： [0007]一种CpG ODN佐剂， 具体序列如表1所示。 [0008]表1 [0009]CpG ODN名称 序列 CpG ODN‑1 TGACTGTGA ACGTTCGAGAAGA CpG ODN‑2 ATTCCTGCACGT TCGAGTCCATT说　明　书 1/7 页 3 CN 114836416 A 3