(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210765719.9 (22)申请日 2022.06.30 (71)申请人 中南大学湘雅医院 地址 410008 湖南省长 沙市湘雅路87号 (72)发明人 唐北沙　郭纪锋　李津臣　刘振华　 潘宏旭　 (74)专利代理 机构 北京知果之信知识产权代理 有限公司 1 1541 专利代理师 苏利 (51)Int.Cl. C12Q 1/6883(2018.01) C12Q 1/6858(2018.01) C12N 15/11(2006.01) G16B 25/20(2019.01) G16B 20/30(2019.01) (54)发明名称 PD风险位点检测试剂盒及其使用方法、 风险 评分方法 (57)摘要 本申请公开了一种PD风险位点检测试剂盒 及其使用方法、 风险评分方法。 该检测试剂盒包 括： SNP所在片段的52对引物组、 dNTP、 DNA聚合 酶、 PCR扩增缓冲液和Sequenom  MassARRAY基因 分型常规组件与试剂。 实现的检测位点为针对亚 裔PD人群开发的PD风险相关位点， 可准确反映亚 裔人群的PD遗传特征， 可用于评估正常人患PD的 风险， 辅助PD的临床诊断， 实现早期诊断早期治 疗； 可准确、 快捷、 经济的检测大量样本的数十个 特定位点的基因型信息， 相较已有的高通量二代 测序数据具有成本低廉的优点， 相较较为传统的 Sanger测序法、 KASP技术、 Taqman技术方法， 具有 通量高、 检测迅速的优势； 构建了多基因风险评 分模型， 能够从遗传学角度全面评估检测人的患 病风险。 权利要求书2页 说明书13页 序列表25页 CN 115537460 A 2022.12.30 CN 115537460 A 1.一种PD风险位点检测试剂盒， 其特征在于， 包括： SNP所在片段的52对引 物组、 dNTP、 DNA聚合酶、 PCR扩增缓冲液和Sequen om MassARRAY基因分型常规组件与试剂。 2.根据权利要求1所述的PD风 险位点检测试剂盒， 其特征在于， SNP所在片段的52对引 物组包括： 用于扩增52个SNP位点基因片段的PCR引物对， 以及特异性检测这52个位点基因 型的52条对应Sequenom  MassARRAY 单碱基延伸引物； 其中， 所述PCR引物对包括： PCR正向引 物和PCR反向引物。 3.根据权利要求2所述的PD风险位点检测试剂盒， 其特征在于， 52个所述SNP位点为 rs356182、 rs34778348、 rs11557080、 rs34594498、 rs10513789、 rs33949390、 rs421016、 rs4698412、 rs2251086、 rs61204179、 rs11158026、 rs997368、 rs12456492、 rs2248244、 rs10847864、 rs34311866、 rs10748818、 rs6825004、 rs7938782、 rs1474055、 rs1867598、 rs4140646、 rs10756907、 rs12528068、 rs4653767、 rs199351、 rs1941685、 rs34025766、 rs55818311、 rs6500328、 rs11150601、 rs2904880、 rs75859381、 rs11578699、 rs2042477、 rs11610045、 rs620513、 rs10797576、 rs12147950、 rs1450522、 rs2269906、 rs3104783、 rs12951632、 rs6808178、 rs62333164、 rs7134559、 rs3802920、 rs6658353、 rs61169879、 rs10221156、 rs11683001和rs96 38616。 4.一种试剂盒的使用方法， 其特 征在于， 包括： 检测DNA样品是否满足预设标准， 检测为满足标准的DNA样本将用于后续检测； 采用Sequen om MassARRAY对52个目标SNP位 点进行基因分型检测。 5.根据权利要求4所述的试剂盒的使用方法， 其特征在于， 检测DNA样品是否满足预设 标准， 检测为满足标准的DNA样本将用于后续检测包括： 琼脂糖凝胶电泳分析DNA降解程度以及是否有污染， OD值在1.8～2.0之间则为满足标 准， 将满足标准的DNA样本将用于后续检测。 6.根据权利要求4所述的试剂盒的使用方法， 其特征在于， 检测DNA样品是否满足预设 标准， 检测为满足标准的DNA样本将用于后续检测包括： Qubit对DNA浓度进行精准定量， DNA总量大于40ng则为满足标准， 将满足标准的DNA样 本将用于后续检测。 7.根据权利要求4所述的试剂盒的使用方法， 其特征在于， 采用Sequenom  MassARRAY对 52个目标SNP位 点进行基因分型检测包括： 用各引物扩增目的片段按指定体积比混合并进行PCR反应； 将PCR产物用SAP处 理， 去除体系中游离的dNTP； 用对应的单碱基延伸引物进行 单碱基延伸； 将Clean Resin树脂平铺到树脂板中， 加水到延伸产物的对应孔 内， 将干燥后的树脂倒 入延伸产物板中， 封膜、 旋转； 采用MassARRAY点样仪将树脂纯化后的延伸产物 移至384孔SpectroCHIP芯片上； 将点样后的SpectroCHIP使用MALDI ‑TOF分析， 检测结果使用TYPER软件分型并输出结 果。 8.一种基于P D风险位点的风险评分方法， 其特 征在于， 包括： 利用52个SNP位点的效应值构建多基因风险模型并计算各检测样本的多基因风险评 分； 多基因风险评分计算公式为：权　利　要　求　书 1/2 页 2 CN 115537460 A 2权　利　要　求　书 2/2 页 3 CN 115537460 A 3