(19)国家知识产权局 (12)发明 专利 (10)授权公告 号 (45)授权公告日 (21)申请 号 202211219194.5 (22)申请日 2022.10.08 (65)同一申请的已公布的文献号 申请公布号 CN 115261482 A (43)申请公布日 2022.11.01 (73)专利权人 暨南大学 地址 510630 广东省广州市天河区黄埔大 道西601号 (72)发明人 王敏　汤绍辉　陈埏芳　李玉婷　 冯淑芬　 (74)专利代理 机构 广州艾维专利商标代理事务 所(普通合伙) 44739 专利代理师 黄强 (51)Int.Cl. C12Q 1/6886(2018.01) C12N 15/11(2006.01) (56)对比文件 US 201919 2691 A1,2019.0 6.27 US 20143 63469 A1,2014.12.1 1 CN 105219867 A,2016.01.0 6 CN 103937888 A,2014.07.23CN 113913516 A,202 2.01.11 US 2014147454 A1,2014.0 5.29 US 201316 5337 A1,2013.0 6.27 CN 115032397 A,202 2.09.09 US 201420 0261 A1,2014.07.17 张勇等.HDAC 5对胃癌SGC -7901细胞增殖和 凋亡的影响. 《中国肿瘤临床》 .2017,(第10期), 469-473. 林俊杰等.HDAC 3和HDAC5在乳腺癌中的表达 与临床病理特 征意义. 《中国实验 诊断学》 .2016, (第06期),1001-1003. 严庆波等.miR-181b与胃癌肝 转移生存预后 相关性研究. 《中华 肝脏外科手术学电子杂志》 .2020,(第04期),87-91. Haijuan Gu等.The Ro le of miR-425 6/ HOXC8 Signal ing Axis i n the Gastric Cancer Progres sion: Evidence From l ncRNA- miRNA-mRNA Netw ork Analysis. 《Fro nt Oncol》 .2022,第11卷 Jun Yang等.I nsights I nto the Functi on and Clinical Application of HDAC 5 in Cancer Mana gement. 《Fro nt Oncol》 .2021, 审查员 谢庆宁 (54)发明名称 miR-4256在胃癌治疗、 诊断以及预后评估中 的应用 (57)摘要 本发明涉及miR ‑4256在胃癌治疗、 诊断以及 预后评估中的应用。 本发明对胃癌的发病、 发展 机制进行了深 入研究， 发现miR ‑4256的表达 水平 是一个与胃癌高度关联的因素； 本发明还发现 miR‑4256与HDAC5基因启动子互补结合， 从而促 进HDAC5表达。 本发明通过揭示miR ‑4256与胃癌 疾病的关联性， 将对胃癌发病机制的认知提高到 一个新高度， 为人类攻克胃癌提供了一个新的药 物治疗靶点， 为寻找新型胃癌诊断相关的肿瘤标 记物或新的治疗策略， 有助于为后续的药物研发、 临床治 疗等， 具有重要的科 学意义。 权利要求书1页 说明书11页 附图11页 CN 115261482 B 2022.12.09 CN 115261482 B 1.检测miR ‑4256表达水平的试剂在制备用于胃癌辅助诊断的产品中的应用。 2.根据权利 要求1所述的应用， 其特征在于， 所述检测miR ‑4256表达水平的试剂包括检 测miR‑4256基因表达水平的引物对， 所述引物对上游序列为 ACACTCCAGCTGGGATCTGAC CTGATG， 下游序列为CTCA ACTGGTGTCGTG GA。 3.下调miR ‑4256的转录和/或抑制miR ‑4256的活性的试剂在制备用于治疗胃癌的药物 中的应用； 所述试剂为寡核苷酸， 其序列为AC CUUCAUCAGGUCAGAU。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 115261482 B 2miR‑4256在胃癌治疗、 诊断以及预后评估中的应用 技术领域 [0001]本发明属于分子生物学领域， 特别涉及miR ‑4256在胃癌治疗、 诊断以及预后评估 中的应用。 背景技术 [0002]胃癌是严重危害人类健康的常见恶性肿瘤之一。 虽然近几十年来， 外科手术、 介入 及分子靶向治疗取得了较显著进展， 但胃癌患者的生存率仍然不理想， 主要原因是容易转 移和复发。 因此， 迫切需要进一步探索胃癌进展的确切机制， 以期寻找新的GC诊断生物标志 物和开发有效的治疗干预措施。 [0003]miRNA是一类由基因组编码的长度约为19 ‑24个核苷酸的非编码RNA。 miRNA主要功 能是作为基因表达的负调控因子， 与靶基因mRNA的3'UTR互补结合， 在转录后水平抑制基因 表达。 miRNA通过与靶基因启动子互补结合， 在转录水平激活或抑制基因表达， 从而参与人 类恶性肿 瘤， 包括胃癌的发生发展。 miRNA可稳定存在于血液循环中， 且特异地富集于外泌 体中。 随着分子生物学和测序技术的发展， 循环外泌体 miRNA已成为肿瘤研究领域目前关注 的热点和重点。 研究显示， 相比正常组织， 肿瘤组织分泌的外泌体更多， 甚至可高出正常组 织10倍， 参与肿 瘤微环境、 肿 瘤免疫逃逸的调控。 此外， 研 究还发现， miRNA在外泌体中所占 的比例高于外泌体来源细胞， 表明miRNA特异地富集于外泌体中。 更重要的是， 肿瘤细胞来 源的外泌体及其所包含的miRNA存在于所有体液中， 而且因其脂质双分子层胞膜的特殊结 构， 使得包含在里面的mi RNA、 mRNA等物质不易 发生降解和破坏； 此外尚有研究表明， 细胞外 的miRNA可与Argonaute （Ago） 蛋白组成 复合物进而可避免miRNA被降解酶破坏， 且较容易提 取获得， 因此循环外泌体miRNA被认为是一种理想的液体活检工具。 [0004]miRNA调控基因表达的机制非常复杂， 主要包括转录后水平和转录水平两大类调 控机制。 miRNA介导的转录后水平调控机制在细胞质中进行， 如miRNA靶向基因mRNA  3'UTR 抑制基因表达 （经典模式） 。 另一方面， miRNA介导的转录水平调控机制在细胞核中进行， 包 括miRNA靶向基因启动子上调或下调基因表达。 mi RNA介导的基因表达调控在很大程度上依 赖于Ago蛋白的功能。 miRNA通过与靶基因启动子互补结合， 并指导Ago蛋白在 靶基因启动子 富集， 进而导致激活性组蛋白修饰和RNA聚合酶II在启动子富集， 促进靶基因表达， 或抑制 性组蛋白修饰在启动子富集， 进而抑制靶基因表达。 现有技术中关于 胃癌的发病因素尚不 明确， 而对于miRNA在胃癌的预防、 治疗以及预后过程中的相关作用及影响更是少 有研究， 临床治疗缺乏有效的治疗手段， 因此， 寻找可治疗与胃癌相关的关键 miRNA具有至关重要的 意义。 发明内容 [0005]本发明的目的在于解决现有技术中所存在的胃癌发病因素不明确、 难以进行提前 预防的技术问题， 从而提供了一种 与胃癌发生、 发展高度相关的miRNA， 即miR ‑4256。 通过以 miR‑4256作为标志物， 能够用于对胃癌疾病的发生发展过程进行有效预测， 从而筛选出胃说　明　书 1/11 页 3 CN 115261482 B 3