(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210902147.4 (22)申请日 2022.07.29 (66)本国优先权数据 202210047747.7 202 2.01.17 CN (71)申请人 桂林医学院 地址 541199 广西壮 族自治区桂林市临桂 区致远路1号 (72)发明人 邢雪琨　李红男　刘润生　张佳阳　 亢小敏　林柯庄　王瑞华　陈晓琳　 牙海妮　江俞臻　 (74)专利代理 机构 河南省古格知识产权代理事 务所(普通 合伙) 41197 专利代理师 陈娟 (51)Int.Cl. C12Q 1/6883(2018.01)C12N 15/11(2006.01) A61K 45/00(2006.01) A61P 1/16(2006.01) (54)发明名称 miR-27b-3p在诊断肝缺血再灌注损伤中的 应用 (57)摘要 本发明公开了一种miR ‑27b‑3p在诊断肝缺 血再灌注损伤中的应用。 通过实时定量PCR(qRT ‑ PCR)检测到miR ‑27b‑3p在HIRI肝脏中显著上调。 生物信息学分析表明SMAD4是miR ‑27b‑3p的一个 靶基因。 qRT ‑PCR实验表明miR ‑27b‑3p能激活 SMAD4的表达。 miR ‑27b‑3p模拟物转入HIRI小鼠 后肝损伤加重， SMAD4表达量上升， Wnt/β ‑ catenin通 路被抑制， 细胞凋亡增多， 同时细胞增 殖升高， 加剧缺血再灌注对肝组织的损伤。 miR ‑ 27b‑3p模拟物转入缺氧/复氧AML12肝细胞后的 结果与体内实验有相同的趋势。 因此， 本发明阐 明了miR‑27b‑3p在HIRI中的作用及机制， 为HIRI 的预防和治 疗提供新靶标、 新思路。 权利要求书1页 说明书6页 附图9页 CN 115232870 A 2022.10.25 CN 115232870 A 1.检测样本中miR ‑27b‑3p含量的试剂在制备诊断肝缺血再灌注损伤的试剂盒中或者 制备诊断离体肝细胞低氧损伤的试剂盒中的应用。 2.如权利 要求1所述的应用， 其特征在于， 检测所述miR ‑27b‑3p的含量通过采用实时定 量PCR方法实现。 3.一种试剂 盒， 用于诊断肝缺血再灌注损伤或者离体肝细胞低氧损伤， 其特征在于， 所 述试剂盒包括用于检测miR ‑27b‑3p含量的试剂。 4.如权利要求3所述的试剂盒， 其特征在于， 所述用于检测miR ‑27b‑3p含量的试剂包 括： miR‑27b‑3p逆转录引物： 5'CTCAACTGGTGTCGTG GAGTCGGCAATTCAGTTGAGGCAGAAC 3' miR‑27b‑3p上游引物： 5'ACACTC CAGCTGGGTTCACAGTG GCTAA 3' miR‑27b‑3p下游引物： 5'TG GTGTCGTG GAGTCG 3'。 5.一种用于治疗肝缺血再灌注损伤的药物， 其特征在于， 所述药物含有抑制 miR‑27b‑ 3p的组分。 6.一种用于治疗肝缺血再灌注损伤 的药物， 其特征在于， 所述药物含有降低抑制Wnt/ β‑catenin信号通路的组分。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 115232870 A 2miR‑27b‑3p在诊断肝缺血 再灌注损伤中的应用 技术领域 [0001]本发明涉及生物及医学领域， 尤其涉及miR ‑27b‑3p在诊断肝缺血再灌注损伤中的 应用。 背景技术 [0002]肝脏缺血再灌注损伤(hepatic  ischemia  reperfusion  injury， HIRI)是指肝外 科手术过程中阻断肝脏血流供应一段时间后恢复血流供应， 肝脏功能障碍和结构损伤不仅 没有减轻， 反而加重的病理现象。 HI RI是肝外伤处理、 肝叶切除、 肝移 植等常见的临床问题， 可导致器官功能衰竭、 增加排斥反应的发生率， 对患者的预后及生存 具有很大的影响。 截至 目前， 临床上仍缺乏行之有效的干预措施。 在缺血再灌注过程中， 细胞处于氧化应激状态， 出现内质网应激和钙超载、 线粒体肿胀和外膜断裂、 细胞色素C释放， 从而促发凋亡信号通 路， 导致细胞凋亡的发生。 [0003]检测miRNA的表达水平可以为疾病的临床诊断提供参考。 而 miRNA的异常表达直接 导致一些与疾病发生相关基因的表达异常， 诱 发疾病的发生。 已有报道证明mi RNA可以通过 调控靶基因mRNA的表达， 在疾病发生、 发展及转移中发挥重要作用。 在未来临床治疗中， miRNA不仅可以成为新的疾病早期诊断和疾病进程相关的标记物， 而且也有望通过改变 miRNA的表达或者其靶基因的表达治疗疾病。 寻找和鉴定与疾病发生相关的mi RNA及其靶基 因为miRNA的临床治疗提供基础。 发明内容 [0004]为了克服现有技术的不足， 本 发明的目的之一在 于提供检测样本中miR ‑27b‑3p含 量的试剂在制备诊断肝缺血再灌注损伤的试剂盒中或者制备诊断离体肝细胞低氧损伤的 试剂盒中的应用。 [0005]本发明的目的之一采用如下技术方案 实现： 检测样本中miR ‑27b‑3p含量的试剂在 制备诊断肝缺血再灌注损伤的试剂盒中或者制备诊断离体肝细胞低氧损伤的试剂盒中的 应用。 [0006]作为一种实施方式， 检测所述miR ‑27b‑3p的含量 通过采用实时定量PCR方法实现。 [0007]本发明的目的之二在于提供一种试剂盒。 [0008]本发明的目的之二采用如下技术方案实现： 一种试剂盒， 用于诊断肝缺血再灌注 损伤或者离体肝细胞低氧损伤， 所述试剂盒包括用于检测miR ‑27b‑3p含量的试剂。 [0009]作为一种实施方式， 所述用于检测miR ‑27b‑3p含量的试剂包括： [0010]miR‑27b‑3p逆转录引物： [0011]5'CTCAACTGGTGTCGTG GAGTCGGCAATTCAGTTGAGGCAGAAC 3' [0012]miR‑27b‑3p上游引物： 5'ACACTC CAGCTGGGTTCACAGTG GCTAA 3' [0013]miR‑27b‑3p下游引物： 5'TG GTGTCGTG GAGTCG 3' [0014]本发明的目的之三在于提供一种用于治疗肝 缺血再灌注损伤的药物。说　明　书 1/6 页 3 CN 115232870 A 3