(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202211029136.6 (22)申请日 2022.08.26 (71)申请人 宁夏医科大学 地址 750000 宁夏回族自治区银川市 兴庆 区胜利街1 160号 (72)发明人 侯玲　李光华　彭涛　陶虹　 李艳宁　 (74)专利代理 机构 北京弘权知识产权代理有限 公司 11363 专利代理师 逯长明　朱炎 (51)Int.Cl. C12Q 1/6883(2018.01) C12N 15/11(2006.01) (54)发明名称 MBL基因单核苷酸多态性在检测风湿性关节 炎中的应用 (57)摘要 本申请涉及分子生物和遗传学领域， 提供 MBL基因单核苷酸多态性在检测风湿性 关节炎中 的应用， 具体的用于检测MBL基因自5'末端起的 第‑70位点、 第 ‑336位点、 第 ‑349位点、 第 ‑427位 点、 第+4位点和/或del6位点的单核苷酸多态性 的物质在制备评价或辅助评价待测人患风湿性 关节炎的风险性的试剂盒中的应用。 本申请也揭 示了MBL基因突变与RA的相关性。 权利要求书1页 说明书10页 附图12页 CN 115354073 A 2022.11.18 CN 115354073 A 1.MBL基因单核苷酸多态性在检测风湿性关节炎中的应用， 其特征在于， 所述应用包 括： 用于检测MB L基因自5'末端起的第 ‑70位点、 第 ‑336位点、 第 ‑349位点、 第 ‑427位点、 第+ 4位点和/或del6位点的单核苷酸多态性的物质在制备评价或辅助评价待测人患风湿性关 节炎的风险性的试剂盒中的应用； 所述待测人为宁夏人群。 2.根据权利要求1所述的MBL基因单核苷酸多态性在检测风湿性关节炎中的应用， 其特 征在于， 第 ‑70位点的碱基为C或T， 所述第 ‑336位点的碱基为A或G， 所述第 ‑349位点的碱基 为A或G， 所述第 ‑427位点的碱基为A或C， 所述第+4位点的的碱基为C或T， 所述del6位点为六 个碱基缺失的位 点或无碱基缺失， 六个碱基为A AAGAG。 3.根据权利要求1所述的MBL基因单核苷酸多态性在检测风湿性关节炎中的应用， 其特 征在于， 所述试剂盒包括： 扩增用的特异性引物， dNTP， 用于PCR反应的Taq  DNA聚合酶以及 缓冲液； 所述引物包括： 扩增第‑70位点的引物： F:5' –ATGACCCATCCCTGGCCTCTAGCCG‑3'， R:5'–AGTCTTCCAGCAGCA ACG‑3'； 扩增第‑336位点的引物： F:5' –TCTGTGCATGTC CTCTTCGGGTCCA‑3'， R:5'–ATTCTGGGCTGGGTTGGT‑3'； 扩增第‑349位点的引物： F:5' –TGGGTTGGTGACTAAGGT‑3'， R:5'–GGTAGGCACTATGATGAGC ‑3'； 扩增第‑427位点的引物： F:5' –TCACCAGCTTTCAGAACAGGGCCTG‑3'， R:5'‑GAGAATGAGTGGAAACCC‑3； 扩增第+4 位点的引物： F:5' –CAGATTGTAGGACAGAGGGCAAGCT‑3'， R:5'AAGACGCTGC CACCATAC3'； 扩增del6位 点的引物： F:5' –GCCTGCCAATGAGTAAAT‑3'， R:5'‑GAGAATGAGTGGAAACCC‑3'。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 115354073 A 2MBL基因单核苷酸多态性在检测风湿性关节炎中的应用 技术领域 [0001]本发明涉及分子生物和遗传学领域， 具体涉及MBL基因单核苷酸多态性在检测风 湿性关节炎中的应用。 背景技术 [0002]甘露糖结合凝集素(Mannan ‑Binding  Lectin， MBL)， 又称甘露糖结合蛋白 (Mannan‑BindingProtein,MBP)， 是一种肝源性血清C型凝集素， 属Ca2+依赖型凝集素家族成 员， 广泛存在于多种哺乳动物血液循环中， 在天然免疫中起重要作用。 其主要生理功能有： ①识别糖配体， MBL能选择性地与多种细菌、 病毒、 真菌以及某些肿瘤细胞表面的甘露聚糖 残基结合， 进而启动机体的天然免疫机制， 在免疫功能发挥和稳定中起重要作用； ②启动补 体系统活化， MBL是目前发现的唯一能活化补体系统的胶凝素， CL R是其主要的效应功能区； ③促进吞噬、 免疫调节作用； ④抑制、 中和病毒作用； ⑤精卵识别的信号受体之一。 [0003]MBL基因具有多态性， 其主要的多态性位点包括： 启动子区的MBL ‑221位Y/X、 MBL ‑ 550位H/L、 MBL ‑70位S/T、 MBL ‑349位F/G、 MBL ‑427位V/W、 MBL ‑336位J/K和 一个六碱基缺失 MBL‑del6M/N； 转录起始区的MBL+4位P/Q； 外显子 Ⅰ的MBL52位A /D、 MBL54位A /B和MBL5 7位A/C 密码子突变。 不同的启动子基因型调控MBL基因转录水平， 结合结构基因的突变体， 使得不 同种族人群间， 甚至同一种族不同个体间的MBL血清水平相差很大， 严重和反复感染人群 MBL基因突变的频率显著高于普通人群， 而血清MBL水平低下 可导致免疫缺损。 [0004]类风湿性关节炎(RA)， 强直性脊柱炎， 属中医痹证范畴， 俗有骨痹、 历节风之称。 是 一种以慢性多关节炎症为主要表现的全身性疾病， 多以手足小关节起病， 常呈对称性， 早期 症状为受累关节的疼痛、 肿胀、 活动困难及发僵， 长久不愈的晚期症状则为关节畸形。 本病 在我国人中患病率为0.3％， 是造成我国人群丧 失劳动力与致残的主要病因之一。 本病可见 于任何年龄， 发病一般随着年龄增长而增加， 发病的高峰年龄20 ‑40岁,而女性则在40 ‑60 岁， 类风湿关节炎以女性多发， 女性患者是男性患者的2 ‑3倍。 [0005]有研究显示RA对MBL合成的影响是有限的。 在疾病活动期MBL血清学水平过低， 并 非代谢消耗， 而 是RA病人产生MBL的能力下降。 不同基因型对RA病人的发病存在影 响。 MBL缺 失可能通过以下机制与 RA发病关联， 第一： 免疫复合物介导的炎性变化可用少解释RA患者 的关节病变， 虽然MBL对关节中免疫复合物的清除作用仍未证实， 但MBL缺失导致免疫复合 物清除能力下降， 可能是RA患者关节损害的机制之一； 第二： RA可能是病原微生物： 如链球 菌、 F13病毒、 微小病毒、 逆转录酶病毒等的变态免疫应答的结果。 其可能原因是MBL缺失导 致感染个体暴露于潜在的致病微生物而与RA易感相关； 第三： 有报道RA与无乳型1 gG的显著 增加有关， MBL可识别N ‑乙酞氨基葡萄糖， 后者可能是MBL的配体， MBL与病人关节 中的免疫 球蛋白1gG作用激活补体导 致RA病人关节损伤， 然 而这一机制似乎 是不正确的。 [0006]尚有报道显示了MBL缺失与RA的无相关性， MBL在RA的发病中并无重要作用。 因此 对于MBL基因单核苷酸多态性分布与RA易感性的相关性有 待进一步研究。说　明　书 1/10 页 3 CN 115354073 A 3