(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210582501.X (22)申请日 2022.05.26 (71)申请人 华南农业大 学 地址 510642 广东省广州市天河区五山路 483号 (72)发明人 李加琪　云冰　张哲　袁晓龙　 曾李清　吕媛媛　周尹祺　张豪　 (74)专利代理 机构 广州市华学知识产权代理有 限公司 4 4245 专利代理师 张珍 (51)Int.Cl. C12N 15/113(2010.01) C12N 15/85(2006.01) C12Q 1/6888(2018.01) C12Q 1/6851(2018.01)G01N 33/68(2006.01) C12N 15/11(2006.01) (54)发明名称 lncRNA TAB2-AS调控TAB2在猪卵巢颗粒细 胞中的应用 (57)摘要 本发明公开了lncRNA  TAB2‑AS调控TAB2在 猪卵巢颗粒细胞中的应用。 本发明以lncRNA   TAB2‑AS和TAB2基因为研究对象， 通过构建过表 达和抑制lncRNA  TAB2‑AS， 发现lncRNA  TAB2‑AS 促进TAB2基因的表达， 通过RNA  pulldown验证 lncRNA TAB2‑AS可与TAB2的mRNA结合， 通过检测 培养不同时间的猪卵巢颗粒细胞中lncRNA   TAB2‑AS和TAB2的表 达量发现lncRNA  TAB2‑AS先 于TAB2基因表 达。 本发明通过探究lncRNA  TAB2‑ AS对TAB2基因的调控作用， 对研究lncRNA  TAB2‑ AS和TAB2， 以及其他lncRNA在颗粒细胞功能、 卵 巢发育、 卵巢闭锁的机制中具有很好的应用价 值。 权利要求书2页 说明书8页 序列表3页 附图2页 CN 114940992 A 2022.08.26 CN 114940992 A 1.一种调控猪卵巢颗粒细胞TAB2表达的方法， 其特征在于： 体外环境下， lncRNA  TAB2‑ AS正调控猪卵巢颗粒细胞中TAB2的表达； 通过调节lncRNA  TAB2‑AS的表达水平， 可实现猪 卵巢颗粒细胞中TAB2 表达的调控； 所述的l ncRNA TAB2‑AS核苷酸序列如SEQ  ID NO： 1所示。 2.根据权利要求1所述的方法， 其特 征在于： 增加外源性LncRNA  TAB2‑AS， TAB2 mRNA表达量上升， TAB2蛋白表达量上升； 抑制 lncRNA TAB2‑AS表达， TAB2  mRNA表达量下降， TAB2蛋白表达量下降。 3.根据权利要求2所述的方法， 其特 征在于： 所述的增加外源性LncRNA  TAB2‑AS通过基因过表达技术实现， 采用的基因过表达载体 通过如下 方式制备 得到： (1)提取猪卵巢颗粒细胞的RNA， 将其逆转录成cDNA， 以cDNA为模板进行PCR扩增， 得到 目的片段； (2)将目的片段连接到用限制性内切酶BamH  I和Xho I酶切后的pcDNA3.1载体上， 得到 重组载体。 4.根据权利要求3所述的方法， 其特 征在于： 步骤(1)中进行PCR扩增所用引物如下 所示： lncRNA TAB2‑AS Forward： 5 ′ ‑CGCGGATCCACTGCCCCAACAGTAAAGCA‑3′； lncRNA TAB2‑AS Reverse： 5 ′ ‑CCGCTCGAG GCCCTCATAAGTGCCGATGT‑3′； 其中， 黑色加粗字体部分为保护碱基， 下划线为酶切位 点。 5.根据权利要求2所述的方法， 其特 征在于： 所述的抑制l ncRNA TAB2‑AS表达通过反义寡核苷酸实现。 6.根据权利要求5所述的方法， 其特 征在于： 所述的反义寡核苷酸序列如下： ASO‑lncRNA TAB2‑AS： 5′ ‑AAAGGGCTGTAGGTACTGCT ‑3′。 7.lncRNA  TAB2‑AS调控TAB2在猪卵巢颗粒细胞中的应用， 其特征在于： 体外环境下， 由 增加外源性lncRNA  TAB2‑AS表达引起的抑制猪卵巢颗粒细胞凋亡的功能表型， 能在抑制 TAB2表达后回复； 或者， 由抑制lncRNA  TAB2‑AS表达引起的促进猪卵巢颗粒细胞凋亡的功 能表型， 能在增加外源性TAB2后回复； 所述的lncRNA  TAB2‑AS核苷酸序列如SEQ  ID NO： 1所 示。 8.根据权利要求7 所述的应用， 其特 征在于： 所述的增加外源性TAB2通过基因过表达技术实现， 采用的基因过表达载体通过如下方 式制备得到： (1)提取猪卵巢颗粒细胞的RNA， 将其逆转录成cDNA， 以cDNA为模板进行PCR扩增， 得到 目的片段； (2)将目的片段连接到用限制性内切酶BamH  I和Xba I酶切后的pcDNA3.1载体上， 得到 重组载体。 9.根据权利要求8所述的应用， 其特 征在于： 步骤(1)中进行PCR扩增所用引物如下 所示： TAB2 Forward： 5 ′ ‑CGGGATCCGAATGGCCCAAGGAAGCCAC‑3′； TAB2 Reverse： 5 ′ ‑GCTCTAGA AAGCAGTGA AACTCTCCCCC‑3′；权　利　要　求　书 1/2 页 2 CN 114940992 A 2其中， 黑色加粗字体部分为保护碱基， 下划线为酶切位 点。 10.根据权利要求7 所述的应用， 其特 征在于： 所述的抑制TAB2 表达通过RNA干扰技 术实现， 采用的小干扰片段序列如下： si‑TAB2： 5′ ‑CCCATAGCCAATATAACAT‑3′。权　利　要　求　书 2/2 页 3 CN 114940992 A 3