(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210692779.2 (22)申请日 2022.06.17 (71)申请人 河北省农林科 学院粮油作物研究所 地址 050035 河北省石家庄市开发区恒山 街162号 (72)发明人 贾晓昀　王士杰　朱继杰　赵红霞　 李妙　王国印　 (74)专利代理 机构 北京卓胜佰达知识产权代理 有限公司 16 026 专利代理师 杨洋 (51)Int.Cl. C12Q 1/6895(2018.01) C12N 15/11(2006.01) (54)发明名称 KASP分子标记引物组及其应用 (57)摘要 本发明属于农作物培育技术领域， 具体涉及 一种用于陆地棉第一果枝节位基因分型鉴定的 KASP分子 标记引物组及其应用。 KASP分子 标记引 物组中， 正向引物包含如SEQ  ID NO： 1和SEQ  ID  NO： 2所示序列； 反向引物包含与SEQ  ID NO： 3所 示序列。 该KASP分子标记引物组可以对陆地棉第 一果枝节 位进行准确基因分型， 进而可以准确鉴 定第一果枝节位， 提早预测材料的早熟性和株 型， 为加快适机采棉花新品种的选育效率提供更 多标记资源。 权利要求书1页 说明书5页 序列表1页 附图3页 CN 115125323 A 2022.09.30 CN 115125323 A 1.KASP分子标记引物组， 其特征在于， 正向引物包含如SEQ  ID NO： 1和SEQ  ID NO： 2所 示序列； 反向引物包 含与SEQ ID NO： 3所示序列。 2.检测试剂， 其特 征在于， 包括权利要求1所述的KAS P分子标记引物组。 3.根据权利要求1所述的检测试剂， 其特征在于， SEQ  ID NO： 1和SEQ  ID NO： 2分别包含 不同的荧 光接头。 4.检测试剂盒， 其特征在于， 包括权利要求1所述的KASP分子标记引物组或权利要求2 所述的检测试剂。 5.权利要求1所述的KAS P分子标记引物组在陆地棉第一 果枝节位 鉴定中的应用。 6.权利要求1所述的KAS P分子标记引物组在陆地棉育种中的应用。 7.陆地棉第一果枝节位基因分型的方法， 其特征在于， 包括： 使用利要求3所述的检测 试剂对陆地棉的基因 组DNA进行PCR扩增。 8.根据权利要求7所述的陆地棉第一果枝节位基因分型的方法， 其特征在于， PCR扩增 程序包括： 95℃预变性10min； 9 5℃变性20s， 61℃ ‑55℃梯度退火， 每循环降0.6℃， 共10个循 环； 95℃变性20s， 5 5℃退火， 共3 0‑34个循环。 9.根据权利要求7或8所述的陆地棉第一果枝节位基因分型的方法， 其特征在于， PCR扩 增结束后， 根据PCR扩增产物荧 光值比值的差异， 鉴定陆地棉基因分型情况。 10.根据权利要求9所述的陆地棉第一果枝节位基因分型的方法， 其特征在于， SEQ  ID  NO： 1和SEQ  ID NO： 2分别连接FAM和HEX， 杂合型陆地棉基因组DNA的FAM和HEX荧光比值为 0.8‑1.2， 纯合型陆地棉基因 组DNA的FAM和H EX的荧光比值大于2或小于 0.5。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 115125323 A 2KASP分子标记引物组及其应用 技术领域 [0001]本发明属于农作物培育技术领域， 具体涉及一种用于陆地棉第一果枝节位基因分 型鉴定的KAS P分子标记引物组及其应用。 背景技术 [0002]陆地棉是世界上播种面积最大、 产量最高的棉种， 占棉花年产量90％以上， 对纺织 业的发展和农民经济收入有重要贡献。 近年来， 由于植棉劳动力的不断减少， 全程机械化、 轻简化栽培成为棉花生产的主推技术， 早熟性和适机采株型成为棉花育种的重要研究内 容， 实现二者的同步改良将有利于适机采品种的高效选育。 第一果枝节位(Node  of the  first fruiting  branch， NFFB)是棉 花的重要株型性状， 其高度是机械采摘的重要参考指 标， 二者为极显著 正相关关系。 据研究， 第一果枝节位高度不低于18 cm是机采品种的重要标 准。 同时， 第一果枝节 位是早熟性的重要指示性状， 与开花期、 吐絮期等呈极显著 正相关， 是 鉴定早熟性最可靠的指标。 与开花期、 吐絮期等其他早熟性状相比， 第一果枝节位不受病虫 害导致的落蕾落铃等的影响； 与株高、 第一果枝节位高度等其他株型性状相比， 第一果枝节 位可以提早鉴定， 节省时间， 且受化控影响较小。 因此， 第一果枝节 位表型的准确性高， 通过 其进行早熟性和株型鉴定的可靠性强。 [0003]由此可知， 第一果枝节位是实现棉花早熟性和适机采株型同步改良的关键性状。 然而， 长期以来， 产量和纤维品质是棉花育种和生产的主导性状， 研究人员对棉花早熟性和 株型的基础研究较少， 现有研究结果难以从分子水平实现二者的同步改良， 加之二者与产 量和纤维品质之 间存在复杂的互作关系， 适机采品种的选育始终处于较低水平。 因此， 亟待 开发陆地棉第一 果枝节位相关的有效基因和分子标记。 发明内容 [0004]针对以上问题， 本发明目的之一在于提供一种用于陆地棉第一果枝节位相关基 因 鉴定及分型的KASP分子标记引物组， 该引物组可以准确对陆地棉第一果枝节 位进行基因分 型， 且具有良好的分型效果。 [0005]本发明一方面提供了一种 KASP分子标记引物组， 正向引物包含如SEQ  ID NO： 1和 SEQ ID NO： 2所示序列； 反向引物包 含与SEQ ID NO： 3所示序列。 [0006]本发明另一方面 提供了一种检测试剂， 其包括上述的KAS P分子标记引物组。 [0007]本发明再一方面提供了一种检测试剂盒， 其包括上述的KASP分子标记引物组或上 述的检测试剂。 [0008]本发明再一方面提供了一种上述的KASP分子标记引物组在陆地棉第一果枝节位 鉴定中的应用。 [0009]本发明再一方面 提供了一种上述的KAS P分子标记引物组在陆地棉育种中的应用。 [0010]本发明再一方面提供了一种陆地棉第一果枝节位基因分型的方法， 包括： 使用上 述的KASP分子标记引物组或上述的检测试剂对陆地棉的基因 组DNA进行PCR扩增。说　明　书 1/5 页 3 CN 115125323 A 3