(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210666915.0 (22)申请日 2022.06.13 (71)申请人 莆田学院 地址 351100 福建省莆田市城厢区学园中 街1133号 (72)发明人 张趁华　范灵婷　杨春艳　汪冰冰　 (74)专利代理 机构 福州市景弘专利代理事务所 (普通合伙) 35219 专利代理师 方圆 (51)Int.Cl. C12Q 1/689(2018.01) C12Q 1/686(2018.01) C12N 15/11(2006.01) C12R 1/42(2006.01) (54)发明名称 5种致病性沙门氏菌的PCR引物及其致病性 沙门氏菌PCR扩增试剂盒 (57)摘要 本发明涉及5种致病性沙门氏菌(鼠沙门氏 菌、 乙型副沙门氏菌、 甲型副沙门菌、 伤寒沙门氏 菌、 肠炎沙门氏菌)的flic基因的特异性片段， 设 计用于特异扩增的5对上下游引物， 以及不同大 小的扩增产物(鼠沙门氏菌 ‑376bp、 乙型副沙门 氏菌‑257bp、 甲型副沙门菌 ‑306bp、 伤寒沙门氏 菌‑474bp、 肠炎沙门氏菌 ‑170bp)， 5对引物可以 单独或组合进行使用， 分别对对应的致病性沙门 氏菌进行扩增。 5种引物可用于致病性沙门氏菌 PCR扩增试剂盒、 多重致病性沙门氏菌PCR扩增试 剂盒、 多重致病性沙门氏菌PCR检测试剂盒中， 以 及采用以上试剂盒的PCR扩增方法以及PCR检测 试剂盒。 权利要求书1页 说明书10页 序列表9页 附图9页 CN 115058526 A 2022.09.16 CN 115058526 A 1.一种甲型副沙门菌的PCR引物， 其特征在于， 所述引物包括上游引物和下游引物， 所 述上游引物的DNA序列为SEQID1所示的核苷酸序列， 所述下游引物的DNA序列为SEQID2所示 的核苷酸序列。 2.一种乙型副沙门氏菌的PCR引物， 其特征在于， 所述引物包括上游引物和下游引物， 所述上游引物的DNA序列为SEQID3所示的核苷酸序列， 所述下游引物的DNA序列为SEQID4所 示的核苷酸序列。 3.一种伤寒沙门氏菌的PCR引物， 其特征在于， 所述引物包括上游引物和下游引物， 所 述上游引物的DNA序列为SEQID5所示的核苷酸序列， 所述下游引物的DNA序列为SEQID6所示 的核苷酸序列。 4.一种肠炎沙门氏菌的PCR引物， 其特征在于， 所述引物包括上游引物和下游引物， 所 述上游引物的DNA序列为SEQID7所示的核苷酸序列， 所述下游引物的DNA序列为SEQID8所示 的核苷酸序列。 5.一种鼠沙门氏菌的PCR引物， 其特征在于， 所述引物包括上游引物和下游引物， 所述 上游引物的DNA序列为SEQID9所示的核苷酸序列， 所述下游引物的DNA序列为SEQID10所示 的核苷酸序列。 6.一种致病性沙门氏菌PCR扩增试剂盒， 其特征在于， 所述致病性沙门氏菌PCR扩增试 剂盒内包括权利要求1 ‑5任一所述的PCR引物。 7.一种致病性沙门氏菌PCR扩增方法， 其特征在于， 所述PCR扩增方法使用了权利要求6 所述的致病性沙门氏菌PCR扩增试剂盒。 8.一种多重致病性沙门氏菌PCR扩增试剂盒， 其特征在于， 所述多重致病性沙门氏菌 PCR扩增试剂盒内包括2个以上权利要求1 ‑5所述的PCR引物。 9.根据权利要求8所述的多重致病性沙门氏菌PCR扩增试剂盒， 其特征在于， 所述多重 致病性沙门氏菌PCR扩增试剂盒内还 包括所述PCR引物对应的DNA探针。 10.一种多重致病性沙门氏菌PCR扩增方法， 其特征在于， 所述PCR扩增方法使用了权利 要求8所述的多重致病性沙门氏菌PCR扩增试剂盒。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 115058526 A 25种致病性沙门氏菌的PCR引物及其致病性沙门氏菌PCR扩增 试剂盒 技术领域 [0001]本发明涉及生物医学工程领域， 特别涉及5种致病性沙门氏菌的PCR引物及其致病 性沙门氏菌PCR扩增试剂盒。 背景技术 [0002]沙门氏菌属(Salmonella)是一大群寄生于人类和动物肠道内生化反应和抗原构 造相似的革兰氏阴性杆菌统称为沙门氏杆菌 。 [0003]沙门氏菌可污染肉、 蛋、 奶等食品， 使人发生食物中毒。 据统计， 全球人类各种细菌 性食物中毒病中， 沙门氏菌引起的食物中毒常列榜首。 因此， 该病在人医、 兽医和公共卫生 上均有十 分重要的意义， 因此， 建立一种快速准确的检测沙门氏菌的技术， 能够及时确定病 原体， 有利于人们及时采取有效防控措施， 对于减少养殖场经济损失具有重要意 义。 [0004]近年来， PCR方法在沙门氏菌的检测中得以广 泛的应用， 该方法可以弥补沙门氏菌 经典检测方法的不 足， 而且具有良好的特异 性和敏感性。 1992 年， Rahn等首先设计出一对引 物， 用PCR检测沙门氏菌， 检出率为97％， 之后， PCR技术被广泛地应用于有害微生物的检测。 目前， 用于沙门氏菌PCR检测的引物主要分为三类： 属特异基因引物、 血清群特异基因引物 和血清型特异基因引物。 属特异基因是沙门氏菌属中的保守序列， 该序列的有无是判断菌 株是否属于沙门氏菌的依据。 沙门氏菌的PCR快速检测方法通常是基于属特异性基因的基 因序列， 其属特异基因主要有hut基因(编码组氨 酸转运操纵子)、 inv基因簇(编码吸附和侵 袭上皮细胞表 面蛋白)、 hil基因(编码 侵袭基因正调节蛋白)、 fim基因(编码I型菌毛主要的 亚单元)、 hns基因(编码与蛋白质结合的DNA)、 spv基因(编码 沙门氏菌毒性质粒相关的毒力 因子)和16SrRNA基因(核糖 体重要组成部分)。 [0005]随着分子技术的发展， 在PCR的基础上发展了多重PCR(multiplex  PCR， mPCR)技 术， 多重P CR在食源性致病菌的检验 上已得到较好应用， 可以同时检测一种致病菌的多个基 因， 也可以同时检测多种致病菌。 如Soo  Jin Yang等建立了鉴定动物源性多重耐药的鼠伤 寒沙门氏菌及肠炎沙门氏菌的多重PCR； Chai  Fung Pui等建立了检测伤寒沙门氏菌和鼠伤 寒沙门氏菌的多重PCR方法； Min ‑Su Kang等建立了鸡肠道沙门氏菌中鸡白痢和鸡伤寒及鸡 伤寒活疫苗株9R鉴定的多重P CR方法。 该技术弥补了沙门氏菌经典检测方法的不 足， 而且具 有良好的特异性和敏感性。 发明内容 [0006]本申请第一方面， 提供一种甲型副沙门菌的PCR引物， 所述引物包括上游引物和下 游引物， 所述上游引物的DNA序列为SEQID1所示的核苷酸序列， 所述下游引物的DNA序列为 SEQID2所示的核苷酸序列。 该上下游引物序列进行扩增， 得到SEQID11所示的306bp核苷酸 序列。 [0007]本申请第二方面， 提供一种乙型副沙门氏菌的PCR引物， 所述引物包括上游引物和说　明　书 1/10 页 3 CN 115058526 A 3