ICS 650.020.40 B21 DB2302 黑 龙 江 省 齐 齐 哈 尔 市 地 方 标 准 DB 2302/T 012—2021 马铃薯试管苗继代培养技术规程 2021 - 12 - 26 发布 齐齐哈尔市市场监督管理局 2022 - 01 - 26 实施 发 布 DB2302/T 012—2021 目 次 前言 ............................................................................... III 引言 ................................................................................ IV 1 范围 ............................................................................... 1 2 规范性引用文件 ..................................................................... 1 3 术语和定义 ......................................................................... 1 3.1 3.2 3.3 3.4 试管苗 ......................................................................... 脱毒试管苗 ..................................................................... 继代 ........................................................................... 继代培养 ....................................................................... 1 1 1 1 4 材料选择 ........................................................................... 1 4.1 症状学观察 ..................................................................... 4.1.1 繁殖材料 ................................................................... 4.1.2 症状学观察 ................................................................. 4.2 类病毒与病毒病检测 ............................................................. 4.2.1 RT-PCR 法检测 ............................................................... 4.2.2 DAS-ELISA 法检测 ............................................................ 4.3 材料选择 ....................................................................... 2 2 2 2 2 3 3 5 培养基制备 ......................................................................... 3 5.1 器材与试剂 ..................................................................... 5.2 操作程序 ....................................................................... 5.2.1 洗涤 ....................................................................... 5.2.2 MS 培养基药品母液配制和保存 ................................................. 5.2.3 MS 培养基制备 ............................................................... 5.2.4 培养基的分装和灭菌 ......................................................... 3 3 3 3 3 4 6 茎段剪切 ........................................................................... 4 6.1 器材与试剂 ..................................................................... 6.2 操作程序 ....................................................................... 6.2.1 无菌操作室内消毒杀菌 ....................................................... 6.2.1.1 操作前消毒杀菌 ......................................................... 6.2.1.2 操作中消毒 ............................................................. 6.2.2 茎段剪切 ................................................................... 4 4 4 4 4 4 7 组织培养 ........................................................................... 5 7.1 器材 ........................................................................... 5 7.2 组培条件 ....................................................................... 5 I DB2302/T 012—2021 8 档案管理 ........................................................................... 5 附录 A（规范性附录） MS 培养基配方 .................................................... 6 II DB2302/T 012—2021 前 言 本文件按照 GB-T1.1-2020 《标准化工作导则 第 1 部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定起草。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。 本文件由齐齐哈尔市农业农村局归口。 本文件起草单位：黑龙江省农业科学院克山分院。 本文件主要起草人：宋继玲、杨梦平、娄树宝、祝海娟、辛丹丹、刘喜才、孙邦升、刘春生、孙旭红、 王 聪、王立春、孔德崴。 III DB2302/T 012—2021 引 言 由于具有繁殖速度快，生长整齐一致，高产高效、优质、性状稳定和便于运输等优点，马铃薯主要 生产国都采用马铃薯试管苗继代培养技术。黑龙江省农业科学院克山分院自 1978 年借鉴国外先进经验， 将马铃薯茎尖组织培养技术应用于马铃薯种质资源保存，从 40 多年的试管苗继代培养工作中不断总结 经验，改进技术，建立了一套便捷、快速、安全、污染率极低的继代培养技术，总结出一套马铃薯试管 苗继代培养技术规程。 IV DB2302/T 012—2021 马铃薯试管苗继代培养技术规程 1 范围 本文件规定了马铃薯试管苗继代培养的术语和定义、材料选择、培养基制备、茎段剪切、组培培养 技术要求。 本文件适用于齐齐哈尔地域内马铃薯试管苗继代培养的安全生产与保存。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T29378-2012 马铃薯脱毒种薯生产技术规程 NY/T 401-2000 脱毒马铃薯种薯（苗）检测技术规程方法 NY/T1606-2008 马铃薯种薯生产技术操作规程 NY/T 1962-2010 马铃薯纺锤块茎类病毒检测技术规程方法 3 术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 3.1 试管苗 在组织培养中成苗前的过渡阶段，在试管中培育后逐渐转移移栽或运输。 3.2 脱毒试管苗 经检测确认不带马铃薯 X 病毒(PVX)、马铃薯 Y 病毒(PVY)、马铃薯 S 病毒(PVS)、 马铃薯卷叶病 毒(PLRV)、马铃薯 A 病毒（PVA）、马铃薯 M 病毒（PVM）和马铃薯纺锤块茎类病毒（PSTVd）的试 管苗。 3.3 继代 愈伤组织在培养基上生长一段时间后，由于营养物质枯竭，水分散失，以及代谢产物的积累，须转 移到新鲜培养基上培养的过程叫做继代。 3.4 继代培养 继代培养是继初代培养之后的连续数代的扩繁培养过程。 1 DB2302/T 012—2021 4 材料选择 采用田间症状学观察与DAS-ELISA法检测、RT-PCR法检测相结合的方法。 4.1 症状学观察 4.1.1 繁殖材料 每份待观察马铃薯试管苗均扩繁 10 株，并编号。5 月上旬于温室内假植，6 月上旬定植于防虫网棚。 每份马铃薯试管苗种植 1 行，行距 60cm，株距 30cm。每隔 5 行马铃薯试管苗种植 1 行当地主栽品种的 脱毒种薯为对照。田间管理同当地网棚管理相同。 4.1.2 症状学观察 生育期间观察每份