ICS 65.020.20 CCS B 05 3502 厦 门 市 标 准 化 指 导 性 技 术 文 件 DB3502/T 083—2022 铁皮石斛种苗繁育技术规程 Technical specifications for seedling propagation of Dendrobium officinale 2022-06-13 发布 2022-06-13 实施 发 布 DB3502/T 083—2022 目录 前 言 .............................................................................2 1 范围 .................................................................................3 2 规范性引用文件 .......................................................................3 3 术语和定义 ...........................................................................3 4 种苗繁育工厂 .........................................................................4 5 种子获得 .............................................................................5 6 实生苗培育技术 .......................................................................5 7 种苗质量要求及检验方法 ...............................................................6 8 标签、包装和运输 .....................................................................7 9 档案和检疫检验 .......................................................................7 附录 A（资料性）铁皮石斛实生苗培养基配方 ...............................................8 1 DB3502/T 083—2022 前 言 本文件按照GB/T 1.1—2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定起 草。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。 本文件由厦门市农业农村局提出并归口。 本文件起草单位：厦门塔斯曼生物工程有限公司、厦门市标准化研究院、厦门市食品药品审评认证 与不良反应监测中心。 本文件主要起草人：卢绍基、沈群红、林文亮、余良、孙金全、陈剑成。 本文件为首次发布。 2 DB3502/T 083—2022 铁皮石斛种苗繁育技术规程 1 范围 本文件规定了铁皮石斛种苗的术语和定义、种苗繁育工厂、种子的获得、种苗培育技术、优质种苗 的质量要求、检验方法、检验规则、标签、包装、运输、档案、检疫检验等要求。 本文件适用于铁皮石斛种苗工厂化生产。 2 规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件， 仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本 文件。 GB 3095 环境空气质量标准 GB 5749 生活饮用水卫生标标准 GB 15569 农业植物调运检疫规程 GB/T 10111 随机数的产生及其在产品质量抽样检验中的应用程序 《中国植物志》[（第 19 卷）2004 年版] 3 术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 3.1 铁皮石斛 Dendrobium officinale 铁皮石斛（Dendrobium officinale Kimura et Migo），又名黑节草、铁皮石斛枫斗（加工干品通称）， 为兰科石斛属多年生草本植物。 3.2 实生苗 seedling 铁皮石斛种子经过无菌播种，萌发生长得到的种苗。 3.3 原球茎 protocorm 由铁皮石斛种子诱导产生，具出叶长根潜能的球状器官。 3.4 培养基 culture medium 3 DB3502/T 083—2022 由大量元素、微量元素、有机物、激素等配制而成，能够满足铁皮石斛种子能发和幼苗生长的营养 基质。 炼苗 hardened seedling 采用自然散射光、人工控制温度、荫蔽等措施对达到出瓶规格的瓶装苗进行适应性锻炼，以增加抵 抗能力的过程。 3.5 驯化苗 domesticated seedling 瓶苗出瓶后移栽到温室苗床种植，过渡生长3～6个月后存活下来的苗。 4 种苗繁育工厂 4.1 场地环境 铁皮石斛种苗工厂包括组培车间、温室和办公区，周围100 m内不允许有垃圾堆放或其他污染源， 且四周通风良好，所使用的水源应达到GB 5749或以上标准要求。大气环境质量应达到GB 3095中二级或 以上标准要求。 4.2 组培车间 4.2.1 主要功能室 4.2.1.1 配制室：作为培养基配制的场所，要求卫生保持清洁干净。 4.2.1.2 灭菌室：作为培养基、接种工具、无菌材料的高温灭菌处理场所，要求干净整洁，并建有水 池和台板，以便于操作。 4.2.1.3 储藏室：作为培养基储藏场所，要求卫生保持清洁干净，温度 20℃～23℃，湿度≤40%，具 备防尘、防潮和避光。 4.2.1.4 接种室：作为培养材料的消毒和接种、培养物的继代转移的场所，要求密闭、清洁、整齐， 装有紫外灯，能随时灭菌。 4.2.1.5 培养室：作为种子实生培养的场所，要求卫生保持清洁干净，温湿度均匀一致，内置多层培 养架，能根据瓶苗生长、培养目的进行培养温度和光照强度的调控。 4.2.1.6 实验室：作为瓶苗分析检测的场所，要求卫生保持清洁干净。 4.3 温室 作为瓶苗适应性锻炼的场所，要求卫生保持清洁干净，通风透气，能根据瓶苗生长进行光照、温度 及湿度的调控。 4.4 需要配备的仪器设备及化学试剂 4.4.1 仪器设备：植物组培所需的仪器设备，如高压灭菌锅、超净工作台、培养架、灌装机、洗瓶机、 冰箱、电子天平、电子秤等。 4.4.2 化学试剂：生产瓶苗所需化学试剂，如无机盐类和有机物类、植物激素等；消毒试剂，如次氯 酸钠、酒精等。 4 DB3502/T 083—2022 5 种子获得 5.1.1 种源选用：用于生产种子的种源应符合《中国植物志》第 19 卷收载的兰科植物铁皮石斛的植物 特征。经分类鉴定确认，推荐选用高产、抗性强并适合本地气候的品种或品系。 5.1.2 亲本选择：应选择形态特征典型，长势均匀，生长健壮的 3 年生以上植株。 5.1.3 人工授粉：在 5 月份盛花期进行人工授粉，挂牌标签，标明授粉时间、方法、编号。 5.1.4 种子采收：授粉 4～6 个月以后，蒴果开始转黄未开裂时，选择饱满的蒴果，带果柄一起采收。 5.1.5 种子保存：采收的蒴果用吸水纸包裹后保存在 4℃冰箱中，备用。 6 实生苗培育技术 6.1 培养容器清洗 生产所用的培养容器，应先进行清洗干净后，放置沥干。 6.2 培养基配制和灭菌 6.2.1 培养基配制：以 MS 培养基为基础，适配铁皮石斛培养所需营养物质，添加纯水搅拌充分溶解， 调整 pH 至 6.0 左右。 6.2.2 培养基装瓶：用灌装机分装到培养瓶，瓶内培养基高度为 1cm 左右。 6.2.3 培养基灭菌：将分装密封好的培养瓶放入高压灭菌锅内，灭菌压力 0.24 MPa，时间 20 min。 6.2.4 培养基储藏：将灭菌好的培养基放置储藏室备用。储藏时间不应超过 1 个月。 6.3 无菌播种 在接种室超净工作台，将采收已后熟 7 d 的蒴果置于无菌的接种皿中；采用 70%～75%酒精对蒴果 表面擦拭 3～5s 或 10%次氯酸钠浸泡 5 min 后，将蒴果切开，用镊子夹住果柄端在培养瓶瓶口边轻轻抖 动，边转动培养瓶，使粉末状种子均匀撒播到诱导培养基上（配方推荐附录 A 诱导培养基），每个蒴果 接种 5～8 瓶。 6.4 瓶苗培养 6.4.1 诱导培养：将接种后的培养瓶放置于培养室，温度为 24～28℃，光照强度为 1600～3500lx，每 天光照时间 8～12h，培养形成原球茎。 6.4.2 分化培养：在原球茎生长膨大至 3～5mm，转接到分化培养基（配方推荐见附录 A 分化培养基） 进行出芽长叶，温度为 23～25℃，光照强度为 1600～2000lx，每天光照时间 8～12h。 6.4.3 分瓶培养：瓶内苗过于密集需进行分瓶（配方推荐见附录 A 分化培养基），每瓶数量 80～100 株。培养室温度 24℃～26℃，光照强度 2000lx～2600lx，每天光照时间 10h～12h。 6.4.4 生根培养：分化苗长到 2.0～4.0cm 左右，转入生根培养基（配方推荐见附录 A 生根培养基）， 每瓶数量 20～40 株。培养室条件，温度为 25℃～27℃、光照强度为 2200lx～2800lx，每天光照时间 10h～ 12h，待瓶苗长到 5～8 cm、根 2～5 条时，即达到出瓶规格。 6.5 瓶苗出瓶和移栽 6.5.1 炼苗：将培养瓶移至温室，使其在开放变化的环境中逐渐适应自然环境 14d～21d，待瓶苗叶色 浓绿时即可出瓶种植。 5 DB3502/T 083—2022 6.5.2 适温：出瓶前先将瓶盖打开，让瓶苗暴露在空气中放置 2d～3d，使其适应自然温湿度。 6.5.3 洗苗：将瓶苗小心取出，用清水将根部基质洗净，晾干至根部发白。栽培前要用 0.1%代森锰锌 或生根粉溶液（生根粉按说明书配制）浸泡根部 2min。 6.5.4 移栽：将苗栽到培养基质上，栽培容器应采用透气性、透水性好的容器；栽培基质应采用既能 吸水又能排水，既能透气又有养分的材料。环境要求荫蔽、相对湿度 70%～80%，温度 20℃～25℃。应 避免在高温或严寒条件下移栽。 6.5.5 驯化：经过 3～6 个月驯化，苗生长健壮，可进行第二次移栽。 7 种苗质量要求及检验方法 7.1 通用要求 用于栽培的瓶苗应该为非污染、无烂茎、烂根、黄叶；叶片4片以上，正常展开,叶色嫩绿或翠绿； 合格苗应该在总苗量的80%以上