ICS 11. 220 B 41 中华人民共和国国家标准 GB/T 17999.6—2008 代替GB/T17999.5—1999 SPF 鸡 微生物学监测 第6部分：SPF鸡 酶联免疫吸附试验 SPF chicken—Microbiological surveillance- Part 6:Enzyme-linked immunosorbent assay for SPF chicken 2009-05-01实施 2008-12-31发布 中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局 发布 中国国家标准化管理委员会 中华人民共和国 国家标准 SPF鸡微生物学监测 第6部分：SPF鸡酶联免疫吸附试验 GB/T17999.6—2008 * 中国标准出版社出版发行 北京复兴门外三里河北街16号 邮政编码：100045 网址www.spc.net.cn 电话：6852394668517548 中国标准出版社秦皇岛印刷厂印刷 各地新华书店经销 * 开本8 880X1230 1/16 印张0.5 字数9千字 2009年4月第一版 2009年4月第一次印刷 * 书号：155066：1-36493 如有印装差错 由本社发行中心调换 版权专有侵权必究 举报电话：（010)68533533 GB/T 17999.6—2008 前言 GB/T 17999《SPF鸡 微生物学监测》分为10个部分： 第1部分：SPF鸡 微生物学监测总则； 第2部分：SPF鸡 红细胞凝集抑制试验； 第3部分：SPF鸡 血清中和试验； 第4部分：SPF鸡 血清平板凝集试验； 第5部分：SPF鸡 琼脂扩散试验； 第6部分：SPF鸡 酶联免疫吸附试验； 第7部分：SPF鸡 胚敏感试验； 第8部分：SPF鸡 鸡白沙门氏菌检验； 第9部分：SPF鸡 试管凝集试验； 第10部分：SPF鸡 间接免疫荧光试验。 本部分为GB/T17999的第6部分。 本部分修订参照了GB/T18936—2003《高致病性禽流感诊断技术》、GB/T19167—2003《传染性囊 病诊断技术》、NY/T538一2002《鸡传染性鼻炎诊断技术》、OIE《陆生动物（哺乳动物、禽鸟和蜜蜂）诊断 试验和疫苗手册》（第五版）中的有关规定。 本部分代替GB/T17999.5—1999《SPF鸡酶联免疫吸附试验》。 本部分与GB/T17999.5—1999相比主要变化如下： 增加了间接酶联免疫吸附试验； 增加了附录A“试剂的配制”。 本部分的附录A为规范性附录。 本部分由中华人民共和国农业部提出。 本部分由全国动物防疫标准化技术委员会（SAC/TC181）归口。 本部分起草单位：中国农业科学院哈尔滨兽医研究所、中国动物卫生与流行病学中心、济南斯帕法 斯家禽有限公司。 本部分主要起草人：曲连东、姜骞、韩凌霞、邵卫星、朱果、单忠芳、刘家森、司昌德、郭东春、于海波、 孟庆文。 本部分所代替标准的历次版本发布情况为： GB/T17999.5—1999。 GB/T17999.6—2008 SPF鸡微生物学监测 第6部分：SPF鸡酶联免疫吸附试验 1范围 GB/T17999的本部分规定了酶联免疫吸附试验的技术要求。 本部分间接酶联免疫吸附试验适用于对SPF鸡进行以下病原微生物的血清抗体检测：副鸡嗜血杆 菌（Haemophilus）、鸡毒支原体（Mycoplasmagallisepticum）、滑液囊支原体（Mycoplasmasynoviae） 禽流感病毒（AvianInfluezaVirus）、新城疫病毒（NewcastleDiseaseVirus）、传染性支气管炎病毒 （InfectiousBronchitisVirus）、传染性法氏囊病病毒（InfectiousBursalDiseaseVirus）、网状内皮增生症 病毒（ReticuloendotheliosisVirus）、鸡传染性贫血病毒（ChickenInfectiousAnaemiaVirus）、禽呼肠孤 病毒（病毒性关节炎）（AvianReovirus）、禽脑脊髓炎病毒（AvianEncephalomyelitisVirus）、传染性喉气 管炎病毒（InfectiousLaryngotracheitisVirus）、禽腺病毒IⅢI群（EDS)（AvianAdenovirusGroupI）、淋 巴细胞白血病病毒（LymphoidLeukosisVirus）。 本部分双抗体夹心酶联免疫吸附试验适用于对SPF鸡进行淋巴细胞白血病病毒P27抗原检测。 2原理 间接酶联免疫吸附试验采用已知微生物抗原检测未知抗体，双抗体夹心酶联免疫吸附试验采用已 知抗体检测未知抗原。 3间接酶联免疫吸附试验 3.1试剂 3.1.1包被抗原，阴性、阳性对照血清，羊抗鸡LgG酶标抗体，按说明书保存和使用。 3.1.2包被液、稀释液、底物液、终止液配制方法见附录A， 3.2器材 酶标板，移液器，37℃恒温培养箱，酶标仪。 3.3操作程序 3.3.1抗原包被：将禽流感病毒、传染性支气管炎病毒、传染性法氏囊病病毒、传染性喉气管炎病毒、新 城疫病毒、副鸡嗜血杆菌、禽腺病毒Ⅲ群（EDS）、鸡毒支原体、滑液囊支原体、禽脑脊髓炎病毒、淋巴细胞 白血病病毒、网状内皮增生症病毒、禽呼肠孤病毒（病毒性关节炎）、鸡传染性贫血病毒抗原用包被液稀 释至工作浓度，加入酶标板各孔中，每孔100μL，置4℃冰箱过夜 3.3.2洗涤：甩净孔内抗原溶液，用洗涤液加满各孔，放置5min，然后甩净，如此重复3次。 3.3.3加被检血清：用稀释液将被检血清以1：100稀释，每孔加人100μL，每次操作均设置阴性对照 加不同的血清样品时应换吸头，37℃温箱中作用30min。 3.3.4洗涤：同3.3.2。 3.3.5加羊抗鸡IgG酶标抗体：用稀释液将酶标抗体稀释至工作浓度，每孔加人100μL，37℃温箱中 作用30min。 3.3.6洗涤：同3.3.2。 1