ICS 79.010 B 60 中华人民共和国国家标准 GB/T36056—2018 林业生物质原料分析方法 可溶性糖的测定 Method for analysis of forestry biomass- Determination of soluble saccharides content 2018-10-01实施 2018-03-15发布 中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局 发布 中国国家标准化管理委员会 GB/T36056—2018 前言 本标准按照GB/T1.12009给出的规则起草。 本标准由国家林业局提出。 本标准由全国林业生物质材料标准化技术委员会（SAC/TC416)归口。 本标准起草单位：中国林业科学研究院木材工业研究所、山东农业大学、中国林业科学研究院森林 生态环境与保护研究所、山东瑞三化工科技有限公司、厦门市格灵生物技术有限公司。 本标准主要起草人：范东斌、李琪、韩振泰、李改云、秦特夫、张冉、纪合建、陈智勇。 GB/T360562018 林业生物质原料分析方法 可溶性糖的测定 1范围 本标准规定了林业生物质原料中可溶性糖的测定方法的术语和定义、原理、试剂和材料、仪器和设 备、式样地采取和处理、实验步骤、结果计算和表达、检测低限和精密度、试验报告。 本标准适用于林业生物质原料中木糖、阿拉伯糖、果糖、甘露糖、葡萄糖、蔗糖含量的测定 2规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T30366—2013生物质术语 GB/T35814一2018林业生物质原料分析方法样品处理方法 GB/T35820—2018林业生物质原料分析方法取样方法 GB/T36055—2018林业生物质原料分析方法含水率的测定 3术语和定义 GB/T30366一2013界定的以及下列术语和定义适用于本文件。 3.1 林业生物质forestrybiomass 林业生产和加工过程中产生的生物质。主要包括林产品（如木材、竹材、藤材等）、林业剩余物（如枝 丫、锯末、木屑、梢头、板皮和截头、果壳和果核等采伐剩余物和加工剩余物、造纸废弃物以及废弃木材）、 能源林等 [GB/T303662013,定义2.1.3] 3.2 林业生物质原料可溶性糖 soluble saccharides of forestry biomass 使用热水回流浸提法从林业生物质原料中提取的水溶性糖组分。主要包括木糖、阿拉伯糖、果糖、 甘露糖、葡萄糖和蔗糖。 4原理 用热水提取林业生物质原料中的可溶性糖，提取液经过滤、定容后，采用高效液相色谱测定，外标法 定量。 5试剂和材料 5.1除非另有说明，本标准所用试剂均为分析纯，所用水为蒸馏水或去离子水。 1 GB/T36056—2018 5.2 2乙腈：色谱纯。 5.3流动相水：色谱级。 5.4糖标准品：木糖、阿拉伯糖、果糖、甘露糖、葡萄糖、蔗糖，纯度不低于98%。 5.5糖标准贮备液：分别称取1g（精确至0.1mg）经过（45土3)℃干燥恒重后的木糖、阿拉伯糖、果糖、 甘露糖、葡萄糖、蔗糖的标准品，置于100ml.容量瓶中，加蒸馏水溶解并定容，配制成浓度为10mg/mL的 混合糖标准贮备液。置于0℃～4℃冰箱中，可保存一个月。 5.6糖标准工作液：分别吸取糖标准贮备液0.10mL、0.30mL、0.60mL、0.80mL、1.00mL、3.00mL、 5.00mL置于10mL容量瓶中，加蒸馏水溶解并定容，分别得到0.1mg/mL、0.3mg/mL、0.6mg/mL、 0.8mg/mL、1mg/mL、3mg/mL、5mg/mL的糖标准工作液。 6仪器和设备 6.1高效液相色谱仪，配有示差折光率检测器或蒸发光检测器；建议色谱柱使用氨基色谱柱或其他一 次进样能充分分离木糖、阿拉伯糖、果糖、甘露糖、葡萄糖、蔗糖的色谱柱。 6.2电子天平：精度0.1mg。 6.3恒温水浴。 6.4烘箱。 6.5微量自动进样器：5uL~50uL。 6.6粉碎机。 6.7滤膜：0.22μm。 6.8 3玻璃锥形漏斗：口径75mm。 6.9 9定性滤纸：直径15cm。 6.10磨口锥形瓶：250mL。 6.11 抽滤瓶：250mL。 7试样的采取和处理 处理。准备粒径为250um～425μm（40目～60目）的风干试样不少于200g，置于密闭容器中。 8试验步骤 8.1试样含水率的测定 按照GB/T36055一2018所述湿基含水率测定方法测定试样的含水率。 54G 8.2 2可溶性糖的提取 称取4g~5g（mi，精确至0.1mg）试样，移人容量为250mL的磨口锥形瓶中，加入50mL95℃~ 100℃的热蒸馏水。锥形瓶口装上回流冷凝管，置于沸水浴中（水浴的水平面需高于装有试样的磨口锥 形瓶中的液面），浸提1h，并经常摇荡。冷却后采用倾泻法经定性滤纸过滤，并收集滤液，滤渣用50mL 95℃～100℃的热蒸馏水洗回到磨口锥形瓶中，重复上述浸提操作2次。合并3次滤液，置于200mL 容量瓶中，用蒸馏水定容至刻度（l），取约2mL滤液，用0.22um微孔滤膜过滤至样品瓶，待测。 2 GB/T 36056—2018 8.3液相色谱分析 8.3.1 色谱参考条件 a) 色谱柱：氨基色谱柱（4.6mm×250mm，3.5um），配有相应的保护柱； c） 流速：1.0mL/min； d) 柱温：30℃； e) 检测器：示差折光率检测器； 进样体积：5μL～30μL，取决于提取液浓度。 8.3.2标准工作曲线的绘制 分别吸取7个浓度的糖标准工作液，经0.22um滤膜过滤后，注入高效液相色谱仪，在上述参考色 谱条件下测定糖标准溶液的响应值（峰高），以糖浓度为横坐标、峰高为纵坐标，利用线性回归方法拟合 各糖的标准工作曲线，即： C=knAn+b ..(1) 式中： n 糖种类标识； C—某糖标准溶液浓度，单位为毫克每毫升（mg/mL）； A，一某糖的液相色谱信号响应值； k一某糖标准工作曲线的斜率，单位为毫克每毫升（mg/mL）； 8.3.3试样中可溶性糖的测定 提取液进行重复进样。若提取液中糖浓度过高，先将提取液进行稀释（稀释比例记为D），再进行测定 根据标准工作曲线计算提取液中木糖、阿拉伯糖、果糖、甘露糖、葡萄糖、蔗糖的含量（q）。 结果计算和表达 林业生物质原料中可溶性糖的含量n，单位用毫克每克（mg/g）表示，按式（2）计算： DXq,Xli 100 :(2) 100-W mi 式中： SZC n 糖种类标识； qn 根据标准工作曲线算出的提取液中糖的含量，单位为毫克每毫升（mg/mL）； D—一试样溶液检测前稀释倍数； 提取液总体积，单位为毫升（mL）； mii 试样质量，单位为克（g)； 试样含水率，%。 如果符合重复性，取两次独立测定的算术平均值作为测定结果，精确至小数点后两位。