ICS 65.140 B 47 GB 中华人民共和国国家标准 GB/T 24313—2009 蜂蜡中石蜡的测定 气相色谱-质谱法 Determination of olefin in beeswax- Gas chromatographic-mass spectrum method 2009-09-30发布 2009-12-01实施 中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局 发布 中国国家标准化管理委员会 GB/T24313—2009 前言 本标准的附录A、附录B、附录 C和附录D为资料性附录。 本标准由中华全国供销合作总社提出。 本标准由全国蜂产品标准化工作组归口。 本标准起草单位：中国农业科学院蜜蜂研究所、农业部蜂产品质量监督检验测试中心（北京）。 本标准主要起草人：陈芳、赵静、陈兰珍、薛晓峰、李熠、吴黎明、周金慧、张金振、王鹏、黄京平。 GB/T24313—2009 蜂蜡中石蜡的测定 气相色谱-质谱法 1范围 本标准规定了蜂蜡中石蜡烃类物质的气相色谱-质谱（GC-MS）测定方法 本标准适用于中华蜜蜂（Apiscerana）蜂蜡（以下简称中蜂蜡）、意大利蜜蜂（Apismelliferaligus- tica）蜂蜡（以下简称意蜂蜡）中石蜡烃类物质的测定 本标准对蜂蜡中石蜡烃类物质的判别限为10%。 2规范性引用文件 下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有 的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究 是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准 (GB/T6379.1—2004,ISO5725-1:1994,IDT) GB/T6379.2测量方法与结果的准确度（正确度与精密度） 第2部分：确定标准测量方法重复 性与再现性的基本方法（GB/T6379.2—2004，ISO5725-2：1994,IDT） 3原理 试样用石油醚提取，气相色谱-质谱仪检测，内标法定量，用统计学方法进行判别、 4试剂和材料 4.1石油醚：分析纯。 4.2异三十烷：标准品，纯度99%。 4.3中蜂蜡：取中华蜜蜂的赘脾蜡，以1000mL水100g蜂蜡的比例加水煮沸，粗过滤去除大块杂质， 待冷却后用刀片切除底部杂质，重复提纯一次。 4.4意蜂蜡：取意大利蜜蜂的赘脾蜡，制备方法同4.3。 4.5石蜡：市售纯石蜡。 4.6添加不同比例石蜡的蜂蜡标准品制备：按石蜡与蜂蜡的质量比为1：9；2：8；3：7；4：6；5：5； 6：4：7：3；8：2和9：1逐一称取所需的石蜡（4.5）和蜂蜡（4.3、4.4）标准品共18份，每份样品以 1000mL水100g蜂蜡的比例加水煮沸，使蜂蜡和石蜡充分熔融并搅匀，冷却后取出风干。获得的样品 中添加石蜡的比例为10%、20%30%、40%、50%、60%、70%、80%、90%。 4.7异三十烷烃标准工作液（1000mg/L）：准确称取50.0mg异三十烷烃标准品（4.2）于50mL容量 瓶，用石油醚溶解并定容。一18℃冰箱中保存。 5仪器 5.1气相色谱-质谱仪。 5.2分析天平：感量0.1g和0.0001g。 5.3超声波仪。 1 GB/T24313—2009 5. 4 涡旋混合器。 5粉碎机。 5. 5 5.6电炉。 5.7 移液器：200μL，1mL，5ml。 5.8 3安瓶：1mL。 5. 9 烧杯：1L。 5.10容量瓶：10mL。 5.11 统计软件（MatLab）：具有判别分析功能。 6试样制备与保存 6.1试样的制备 样品经冷冻后破碎至中等块状，粉碎机粉碎，混匀。 6.2试样的保存 于4℃冰箱中保存。 7测定步骤 7.1提取 称取冷冻粉碎样品及各种标准品50.0mg，置于10mL容量瓶中，用石油醚溶解并定容至刻度。分 匀，供气相色谱-质谱测定。 7.2气相色谱-质谱测定 7.2.1气相色谱条件 色谱柱：HP-5ms，30mX0.25mmX0.25μm，或相当者。 进样口温度：280℃。 升温程序：初始炉温为50℃，持续1min； 以20℃/min升温至180℃持续1min； 以15℃/min升温至280℃持续20min 进样体积：1μL，不分流进样。 载气：高纯氮（99.999%），流量为1mL/min。 7.2.2质谱条件 传输管温度：280℃。 离子源温度：250℃。 四极管温度：150℃。 扫描模式：全扫描。 扫描范围：50~550。 7.2.3定性测定 背景后的样品质谱图中，所选择的离子均出现，而且所选择的离子丰度比与标准样品的离子丰度比相一 致（相对丰度>50%，充许±20%偏差；20%<相对丰度≤50%，充许士25%偏差；10%<相对丰度 ≤20%，允许土30%偏差；相对丰度10%，允许土50%偏差），则可判断样品中存在同一烃类或相关化 学物质。 7.2.4定量测定 本标准中气相色谱-质谱采用内标法定量测定。保证所测样品中烃类物质及相关化学物质的响应 2 GB/T24313—2009 值均在仪器的线性范围内。纯蜂蜡、石蜡标准品及样品色谱图参见附录A。 7.3平行试验 按以上步骤对同一试样进行平行试验。 8 结果计算 蜂蜡中正构烷烃含量采用内标法定量，各组分含量按式（1）计算： .(1) 式中： X,—试样中被测组分含量，单位为毫克每升（mg/L)； m—加入内标物的浓度，单位为毫克每升（mg/L）； A,组分i的峰面积； A一内标物的峰面积。 注：测定结果用平行测定的算术平均值表示，保留三位有效数字。 9 结果判定 通过质谱分析确定了17个主要的组分，组分表参见附录B。用统计软件对样品及添加不同比例石 蜡的蜂蜡标准品的各组分进行判别分析，判别分析图参见附录C。当试样的结果最接近某一标准品时， 即可以判定该物质与此类标准品为一类物质。 10 精密度 本标准精密度数据是按照GB/T6379.1和GB/T6379.2的规定确定的，获得重复性和再现性的 值是以95%的可信度来计算的。结果参见附录D。 3